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目的:结核分枝杆菌是胞内寄生菌,入侵宿主时,特异性感染宿主巨噬细胞,并在巨噬细胞中存活。白介素-1受体相关激酶-M(IRAK-M)属于IRAK家族成员,是Toll样受体(TLR)信号机制中的负调节分子,特异性表达于单核/巨噬细胞。本课题从巨噬细胞极化的角度,深入探讨了巨噬细胞IRAK-M分子促进结核分枝杆菌胞内存活的机制,以深入了解结核的发病机制以及宿主与结核分枝杆菌的关系。方法:免疫荧光染色(Immunofluorescence,IF)、Western blot和免疫组织化学技术(Immunohistochemistry,IHC)用于检测M.tb感染U937细胞和肺结核组织学标本中IRAK-M的表达。以经PMA诱导为巨噬细胞的人白血病单核细胞系U937和人急性T淋巴细胞白血病细胞Jurkat为细胞模型,分别用慢病毒(lentivirus,LV)为载体构建IRAKM干扰和过表达体系,M.tb感染后采用抗酸染色(acid-fast staining,AF)和菌落计数(colony forming units,CFU)检测细胞内存活的细菌数目。在U937 IRAK-M干扰体系中,M.tb感染后采用Western blot技术检测M1型巨噬细胞极化标记分子p STAT1、i NOS、NF-κB p65和M2型巨噬细胞极化标记分子p STAT6、Arg-1、NF-κB p50的表达;用免疫激活剂Cp G7909激活U937巨噬细胞首先向M1型极化,继而用M.tb感染细胞,用免疫荧光和Western blot技术检测IRAK-M在M.tb感染中对免疫激活剂诱导的M1型巨噬细胞极化状态的影响;用IHC和Western blot技术检测IRAK-M对与巨噬细胞杀菌和组织修复相关的Hif-1α、p ERK1/2的影响。结果:在结核感染的巨噬细胞和肺组织中,IRAK-M的表达显著升高(P<0.05);在Jurkat细胞中,IRAK-M过表达促进M.tb细胞内增殖,而在U937细胞中,干扰IRAK-M后M.tb细胞内增殖受到抑制;在U937细胞中,结核感染时,干扰IRAK-M促进巨噬细胞M1型极化标记分子p STAT1、i NOS、NF-κB p65的表达,抑制M2型极化的标记分子p STAT6、Arg-1、NF-κB p50的表达,提示干扰IRAK-M可以促进M.tb感染时巨噬细胞向M1型极化;2μg/ml免疫激活剂Cp G7909可诱导U937细胞M1型极化,而M.tb感染抑制Cp G7909诱导的M1型极化,干扰IRAK-M则逆转M.tb抑制的Cp G7909诱导M1型极化;干扰IRAK-M促进与巨噬细胞杀菌和组织修复相关的Hif-1α、p ERK1/2的表达增加。结论:巨噬细胞IRAK-M分子可能通过调控巨噬细胞极化而对胞内寄生菌结核分枝杆菌的胞内存活具有重要的生物学意义,并有可能与其他信号机制,如与宿主组织修复和杀菌有关的Hif-1和MAPK信号机制共同作用,共同对结核分枝杆菌胞内寄生和机体Th1型抗结核免疫反应产生影响。