论文部分内容阅读
茶是人们最喜爱的饮料之一,除了诱人的香味和独特的口感外,还具有一定的营养价值和保健作用。大量的流行病学研究表明饮茶可以减少关节炎、心血管疾病、糖尿病、肥胖症等的发病率,茶的这些对人体有益的作用主要归因于茶叶中所含的多酚类物质,即茶多酚。茶多酚约占茶叶干重的25%左右,以儿茶素为主,其中EGCG(epigallocatechin gallate)的含量最高,约占儿茶素总量的50%左右。这些多酚物质的分子结构中含有多个苯环,而每个苯环上有两个或三个羟基,可作为氢的供体,具有较强的抗氧化作用。同时,茶多酚物质还具有其它一些生物活性。根据加工过程和化学组成的不同,茶叶可分为绿茶、乌龙茶和红茶。本实验选择这几类茶叶中的龙井、碧螺春、黄山毛尖、松针、立顿绿茶、乌龙茶、立顿红茶为实验样品,分析在不同的浸泡条件下(浸泡次数或浸泡时间),其浸出物中茶多酚的含量、儿茶素的组成、抗氧化作用及其可能具有的其它生物效应。实验的主要方法和结果：1.生物活性成分分析采用改进的Folin-Ciocalteu法测定茶多酚的总含量。以没食子酸作为定量测定的标准物质,在1～10μg/mL范围内,没食子酸的吸光度与其质量浓度呈良好的线性关系,R2=0.9983。分析结果表明,绿茶的茶多酚含量最高,136.62 mgGAE/L;随后是乌龙茶,87.73 mgGAE/L;红茶的茶多酚含量最低,80.81mgGAE/L。采用高效液相色谱法对茶叶样品中儿茶素和咖啡碱的含量进行分析。结果表明：茶叶样品中儿茶素类物质的含量顺序为绿茶>乌龙茶>红茶。绿茶中EGCG的含量最高,占儿茶素总量的50.52%。茶多酚含量的差异与这几类茶叶的加工制备方法有关。2.抗氧化作用的测定采用ABTS法、DPPH法和对铁离子的还原能力来评价茶叶样品的抗氧化作用。ABTS结果表明：茶叶样品的抗氧化作用的顺序为绿茶>乌龙茶>红茶,这与对铁离子的还原能力顺序相同；以DPPH的清除率来表示茶叶样品的抗氧化作用,其顺序为绿茶>红茶>乌龙茶。茶叶样品的一次浸泡液对自由基的清除能力均强于二次浸泡液。茶叶浸泡液的抗氧化作用与茶多酚含量呈正相关,即各茶叶样品中茶多酚含量越高,其抗氧化作用越强,其相关系数分别为0.9072(ABTS法)、0.8117(DPPH法)和0.9121(对铁离子的还原能力)。3.茶叶浸泡液可抑制过氧化物诱导的细胞膜蛋白损伤将茶叶浸泡液、t-BHP(tert-butyl hydroperoxide)与红细胞膜作用,然后采用SDS-PAGE检测红细胞膜蛋白谱带。与对照相比,t-BHP对红细胞膜骨架蛋白有损伤作用,形成高分子量聚集体。而加入的茶叶浸泡液可使t-BHP引起的红细胞膜骨架蛋白的聚集体有不同程度的恢复,尤其是对血影蛋白、带3蛋白和锚蛋白条带的聚集体有明显的保护作用。这说明茶叶浸泡液对t-BHP所引起的红细胞膜蛋白损伤有一定的抑制功效,表现其抗氧化作用。4.茶叶浸泡液对溶菌酶纤维诱导细胞膜蛋白交联的影响蛋白质淀粉样纤维可诱导细胞膜蛋白交联,主要涉及蛋白质分子间的巯基-二硫键的交换作用。将茶叶浸泡液、溶菌酶纤维与红细胞膜共同作用,采用SDS-PAGE检测红细胞膜蛋白谱带,结果发现溶菌酶纤维可以诱导红细胞膜骨架蛋白聚集,而加入茶叶浸泡液并不能抑制膜蛋白聚集体的生成,即茶叶浸泡液对溶菌酶纤维所导致的细胞膜蛋白损伤没有作用。5.茶叶浸泡液对红细胞脂质过氧化的影响采用硫代巴比妥酸法(TBA)检测茶叶浸泡液对红细胞脂质过氧化的影响。结果表明：茶叶浸泡液本身不能引起红细胞脂质过氧化,而加入t-BHP做阳性对照的样品在532nm处有较强的吸收峰,且吸光度值随茶叶浸泡液的浓度的增加而减小,说明茶叶浸泡液可以抑制由t-BHP诱导的脂质过氧化,进一步证明了茶叶浸泡液具有抗氧化作用。6.茶叶浸泡液对红细胞高铁血红蛋白(MetHb)含量的影响将茶叶浸泡液作用于红细胞,分别在有、无NaNO2溶液时检测其在631nm处的吸光度。结果表明：在无NaNO2溶液存在时,随茶叶浸泡液浓度的增加,吸光度值有所增加,当浓度达到1 mg/mL时,吸光度值明显增加,说明红细胞中的高铁血红蛋白(Methemoglobin, MetHb)的含量增加；当茶叶浸泡液和NaNO2共同作用于红细胞时,NaNO2可以使血红蛋白迅速地氧化生成MetHb,随着浸泡液浓度的增加,MetHb的含量也随之增加。这就说明浸泡液在较高浓度时具有促氧化作用,并且对NaNO2诱导的红细胞MetHb含量的增加有促进作用,表现出一定的细胞毒性。综上所述,绿茶中茶多酚的含量最高,其抗氧化能力也最强,红茶中的茶多酚含量最小,其抗氧化能力最弱。抗氧化作用主要表现在可有效的清除自由基、对t-BHP诱导的红细胞膜蛋白聚集有修复作用、对t-BHP诱导的脂质过氧化有抑制作用。另一方面,较高浓度的茶叶样品可以使红细胞的MetHb含量增加,并且对NaNO2诱导MetHb具有促进作用,即茶叶浸泡液在一定的条件下可促进细胞氧化,即所谓的双重作用。