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胰岛素/Shc/Ras/ERK信号传导通路与子宮内膜癌发生的相关研究肥胖、高血压、糖尿病被称为子宫内膜癌三联征,这些疾病共同病理生理基础是胰岛素抵抗及继发的高胰岛素血症,提示胰岛素可能与子宮内膜癌存有内在联系,本试验将研究胰岛素/Shc/Ras/ERK通路在子宮内膜癌发生发展中的作用。一、Shc、Grb2蛋白的表达、活化与子宮内膜癌的相关研究目的:探讨Src同源区2结构域蛋白C(src homology domain 2 containingprotein,Shc)和生长因子受体结合蛋白2(growth factor receptor-bound protein 2,Grb2)表达、Shc活化、Shc·Grb2复合物水平与子宮内膜癌发生之间的关系。方法:62例子宮内膜癌、17例非典型增生及25例正常内膜患者均来自天津医科大学总医院妇科。收集临床资料、测量身体指标、检测空腹血清C肽及胰岛素水平。Western blot检测内膜Shc、p-Shc、Grb2蛋白水平,免疫共沉淀/Westernblot检测Shc·Grb2复合物水平。结果:子宫内膜癌组血清C肽和胰岛素水平显著高于正常内膜组。子宮内膜普遍存在Shc的表达和活化,活化程度与循环胰岛素水平正相关。子宫内膜组织普遍存在Grb2表达及一定程度上的Shc·Grb2复合物水平,Shc·Grb2复合物与循环胰岛素水平和Shc活化正相关。子宮内膜癌Shc活化和Shc·Grb2复合物水平增高,并与不良临床病理特征有关。结论:高水平胰岛素可能刺激子宮内膜癌Shc活化并增加Shc·Grb2复合物水平,参与子宫内膜癌发生、发展。二、Ras、ERK表达、活化与子宫内膜癌的相关研究目的:探讨原癌基因Ras、细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulatedkinase,ERK)的表达、ERK的活化与子宫内膜癌发生之间的关系。方法:Western blot检测内膜组织Ras、ERK蛋白表达及ERK活化水平。结果:子宫内膜普遍存在Ras表达、ERK的表达和活化,ERK活化与循环胰岛素水平、p-Shc、Shc-Grb2呈正相关,子宫内膜癌ERK的活化水平显著增加,且与不良临床病理特征有关。结论:胰岛素可能通过磷酸化Shc促进Shc·Grb2复合物形成,促进下游信号分子ERK的活化,参与子宮内膜癌发生、发展。三、细胞周期素D1的表达与子宮内膜癌的相关研究目的:探讨细胞周期素D1(Cyclin D1)的表达与子宫内膜癌发生的关系。方法:Western blot检测CyclinD1蛋白表达水平。结果:子宮内膜普遍存在CyclinD1的表达,并与循环胰岛素水平、p-Shc、Shc·Grb2和p-ERK呈正相关,子宮内膜癌CyclinD1表达显著增高,并与不良临床病理特征有关。结论:提示胰岛素通过活化Shc/Ras/ERK通路促进CyclinD1的表达并参与子宮内膜癌发生、发展。四、胰岛素对子宫内膜癌细胞Shc/Ras/ERK传导通路的活化目的:探讨胰岛素对子宫内膜癌细胞Shc/Ras/ERK通路的活化。方法:研究胰岛素/PD98069对Ishikawa3-H-12细胞Shc、ERK活化、CyclinD1转录及表达情况,Western blot检测蛋白水平,RT-PCR检测mRNA水平。结果:胰岛素可诱导细胞Shc活化、Shc·Grb2复合物形成及ERK活化,分别在胰岛素作用15、15、30 min时达到峰值。胰岛素可诱导细胞CyclinD1转录及蛋白表达,分别在作用12 h、24 h时达到峰值。PD98059则以浓度依赖性方式拮抗胰岛素对ERK的活化、CyclinD1 mRNA及蛋白表达。结论:胰岛素促进子宮内膜癌Ishikawa3-H-12细胞Shc、ERK活化,增加CyclinD1 mRNA转录和蛋白表达,Cyclin D1转录表达是ERK通路依赖性的。五、Ras/KRK信号通路在胰岛素调节子宮内膜癌细胞增殖、凋亡和侵袭中的作用目的:探讨Ras/ERK通路在胰岛素促子宮内膜癌细胞增殖、抑制凋亡和促进侵袭中的作用。方法:MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测凋亡,transwell小室检测侵袭。结果:胰岛素对子宫内膜癌细胞的增殖具有显著的促进作用,而PD988059以浓度依赖性方式抑制胰岛素的促增殖作用。胰岛素显著抑制子宮内膜癌细胞的凋亡,PD988059以浓度依赖性方式拮抗胰岛素的抗凋亡作用。胰岛素促进子宮内膜癌细胞的侵袭,而PD988059部分阻断胰岛素的促侵袭作用。结论:胰岛素可促进子宮内膜癌细胞增殖、抑制细胞凋亡、促进细胞侵袭,其促子宮内膜癌细胞增殖、抑制细胞凋亡作用是ERK通路依赖性的,促子宮内膜癌细胞侵袭作用是部分ERK通路依赖性的。