青楷槭皮成分分析及其体外抗氧化和诱导肺癌细胞凋亡作用研究

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青楷槭(Acer tegmentosum Maxim)是槭属落叶乔木,广泛分布于中国东北部、朝鲜半岛的中北部以及俄罗斯远东南部地区。在韩国、日本的传统医学上,青楷槭常被用于治疗眼病、脓肿和肝病,在中国常将其树皮泡水饮用,具有醒酒护肝和消炎化毒等功能,但是关于其提取物如何发挥抗氧化和抗癌作用的研究少见报道,仍然缺少数据支撑。为了充分利用青楷槭的食用和药用功效,本研究以青楷槭皮为原料,分析其基本成分和矿物质含量;制备热水提取物(ATWE)和乙醇提取物(ATEE),测定其总酚和总黄酮含量,并根据测定结果选择ATWE进行GC-MS分析;通过五种化学方法分析两种提取物的抗氧化能力,并根据试验结果选择ATWE进行细胞水平的抗氧化作用测定,包括对t-BHP诱导的细胞死亡的抑制能力,对SOD、CAT活力和GSH含量的影响以及其对Keap1-Nrf2信号通路的影响;测定ATWE和ATEE对人肺癌细胞A549、人前列腺癌细胞PC3和人乳腺癌细胞MDA-MB 231细胞存活率的影响,并根据试验结果选择ATWE和肺癌细胞A549进行诱导癌细胞凋亡作用分析,包括细胞形态观察、荧光染色(AO/EB、PI、Rh123和DCFH-DA)分析以及对Bcl-1和Bax蛋白表达的影响。主要研究结果如下:1.青楷槭皮及其提取物成分分析:青楷槭皮中水分、粗灰分、粗脂肪、粗蛋白和碳水化合物的含量分别为6.64、5.07、3.53、4.12和80.64%,碳水化合物的含量最多,其中膳食纤维含量为71.08%。矿物质元素中K、Ca、Mg、Mn和Fe元素含量较丰富。ATWE与ATEE中的总酚含量为199.97和103.48mg/g,总黄酮含量为72.10和47.28 mg/g,ATWE的总酚和总黄酮高于ATEE,选择ATWE进行GC-MS分析。在GC-MS分析中,共鉴定出31种成分,分别属于酚类、黄酮类、香豆素、脂肪酸、三萜和甾醇等。2.青楷槭皮提取物抗氧化作用研究:ATWE和ATEE均具有良好的自由基清除和还原能力,总体上ATWE抗氧化能力优于ATEE。在对细胞水平的抗氧化作用测定中,使用700μM的T-BHP构建氧化应激模型,结果显示,ATWE预处理可以显著提高t-BHP诱导后的细胞存活率,增加SOD、CAT活力和GSH的含量。此外,与对照组相比,经过ATWE处理可以显著上调Nrf2的m RNA和蛋白表达并显著下调负反馈因子Keap1的m RNA和蛋白表达。3.青楷槭皮提取物诱导肺癌细胞凋亡作用研究:ATWE和ATEE均能有效抑制三种癌细胞(A549、PC3、MDA-MB 231)的增殖,根据IC50值和选择性指数(SI)的结果,ATWE表现出更好的抗癌能力并对A549细胞为选择性抑制(SI=17.80)。细胞形态观察和荧光染色结果显示,ATWE处理使A549细胞形态改变,凋亡数量增加,核损伤,线粒体电位丧失和ROS增加。此外ATWE处理可以上调Bax蛋白的表达并下调Bcl-2蛋白的表达,并且使Bcl-2/Bax的比值显著降低。综上所述,青楷槭中含有丰富的活性成分,其提取物具有良好的自由基清除和还原能力,ATWE可以对t-BHP诱导的肝细胞氧化损伤起到保护作用,并与Keap1-Nrf2信号通路有关,ATWE可以通过线粒体介导(内源性)的凋亡途径诱导癌细胞凋亡。
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