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目的:对九味通窍汤进行组方分析,并对九味通窍汤中抗脑神经胶质瘤的效应成分筛选,建立大鼠脑神经胶质瘤模型探究效应成分的药效。方法:(1)对九味通窍汤拆方分析,探索抗脑神经胶质瘤细胞增殖作用的最有效部位:根据君臣佐使组合原理将九味通窍汤拆方成7个组方,选用人源脑神经胶质瘤U251细胞进行体外药效筛选,采用噻唑蓝(MTT)法测定各个组方对细胞活力的影响;采用流式细胞术比较组方Ⅳ与全方对U251细胞的凋亡影响;采用Western blot免疫印迹法检测全方及组方Ⅳ对凋亡蛋白P53和抗凋亡蛋白Bcl-2表达影响;组方IV有机溶剂梯度萃取后,采用MTT法测定各萃取部位对U251细胞活力的影响。(2)细胞膜色谱法筛选九味通窍汤效应成分:采用九味通窍汤抗脑神经胶质瘤细胞增殖作用的最有效部位作用于U251细胞,以U251细胞膜为固定相,模拟生理条件下,使两者充分的结合,洗涤去除未结合成分后,将细胞膜裂解失活,使结合的活性成分从细胞膜上释放。固相柱萃取,预处理样品,采用UPLC-TOF/MS对所得活性成分进行分析。(3)细胞色谱法筛选黄芪中的抗脑神经胶质瘤效应成分:采用MTT法分析黄苗对U251细胞活力的影响。采用流式细胞术分析黄芪对U251细胞凋亡的影响。采用U251细胞膜为固定相,选择性地结合黄苗供试液的活性成分,洗涤去除未结合成分,将细胞膜裂解失活,使结合的活性成分从细胞膜上释放。固相柱萃取,预处理样品,采用UPLC-TOF/MS对所得活性成分进行分析。采用MTT法测定所得活性成分对U251细胞活力的影响。采用流式细胞术测定所得活性成分对细胞凋亡的影响。(4)建立大鼠原位脑神经胶质瘤模型:采用大鼠源脑神经胶质瘤C6细胞株,大鼠麻醉后固定于立体定向仪上,消毒皮肤,确定对应于右脑尾状核的钻孔位置,微量注射器将10μLC6细胞悬液缓慢注入左侧尾状核区,建立大鼠脑神经胶质瘤模型。结果:(1)组方Ⅳ对细胞的抑制作用最为明显,且具有浓度依赖性;细胞经组方Ⅳ、全方处理24h后,凋亡率明显高于空白对照组,P<0.01;细胞经组方Ⅳ、全方处理后Bcl-2蛋白表达水平较空白组明显降低,P<0.01,P53蛋白表达水平较空白组明显提高,P<0.01;组方Ⅳ梯度萃取后部位Ⅲ对细胞活力的抑制作用最为明显,且具有浓度依赖性。(2)建立的脑神经胶质瘤细胞膜色谱法,筛选得到供试液中4个效应成分,初步推断为毛蕊异黄酮、芒柄花苷、芒柄花素、毛蕊异黄酮葡萄糖苷。(3)黄芪供试液对细胞活力有明显的抑制作用。细胞经黄芪供试液处理24h后,凋亡率明显提高,P<0.01。建立的脑神经胶质瘤细胞膜色谱成功筛选出黄苗供试液中4个效应成分,初步推断为毛蕊异黄酮、芒柄花苷、芒柄花素、毛蕊异黄酮葡萄糖苷。选择芒柄花素,毛蕊异黄酮体外测定对细胞活力影响,具有一定的抑制作用。体外作用细胞24 h后凋亡率提高。(4)采用大鼠源脑神经胶质瘤C6细胞株,于大鼠右脑尾状核缓慢注入细胞悬液后,成功建立大鼠脑神经胶质瘤模型。结论:组方Ⅳ的部位Ⅲ是抑制脑神经胶质瘤细胞增殖作用的最有效部位,建立脑神经胶质瘤细胞膜色谱法对上述九味通窍汤体外以及黄芪供试液进行效应成分筛选,获得毛蕊异黄酮、芒柄花苷、芒柄花素、毛蕊异黄酮葡萄糖苷4种效应成分。选择芒柄花素、毛蕊异黄酮测定对细胞活力影响,具有一定的抑制作用且具有时间浓度依赖性。成功建立大鼠脑神经胶质瘤模型,为进一步对芒柄花素,毛蕊异黄酮的体内药效作用做铺垫。