HPLC法测定尿样中芳香族化合物的六种代谢产物的研究

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苯、甲苯、苯乙烯、苯胺、硝基苯等芳香族化合物是常见的几种有害物质,广泛应用于工农业生产、医药和科学研究等领域。人体通过呼吸道吸入或经皮肤接触这些有害物质会造成神经、呼吸、皮肤、血液等系统和组织不同程度的损伤。因此,对上述在我国使用较多、且易引起中毒的物质进行监测具有重要意义。有害物质经体内代谢后可在尿液、血液等生物材料中检出,该种生物材料中有害物质代谢产物的生物监测可为环境监测提供有效补充,使监测结果更加科学、准确。然而,目前我国尚未建立用于非职业接触人群尿中多种有害物质代谢产物同时检测的成熟方法,缺少这些有害物质代附物在正常人群尿中的背景值和样本库。为此,建立一种同时检测尿样中多种有害物质代谢产物的分析方法十分必要。本研究建立了同时测定苯、甲苯、苯乙烯、苯胺、硝基苯在尿样中的六种代谢产物反,反-粘康酸、马尿酸、苯乙醇酸、苯乙醛酸、对氨基苯酚和对硝基苯酚的高效液相色谱法。考察了流动相组成及配比、检测波长、流速、柱温和进样量等对六种待测组分分离与检测的影响,确定了最佳色谱条件:Nova-Pak C18色谱柱,以甲醇-混酸水溶液(0.01%磷酸+0.02%醋酸)为流动相,采用梯度洗脱方式,检测波长随时间程序变化,流速1.0mL/min,柱温35℃,进样量10μL。在最佳实验条件下,实现了在20min内对六种组分的同时检测,各组分工作曲线的线性相关系数为0.9993~0.9997,线性范围≥103,检出限为0.003~0.03μg/mL(S/N=3),样品平均加标回收率为86.2%~108.1%,相对标准偏差为2.2%-4.6%。本研究对尿样中六种代谢产物的提取方法进行了系统研究。采用液-液萃取法对尿样进行预处理,通过单因素实验和正交试验设计,确定了最佳预处理条件:以二氯甲烷-异丙醇(v:v=7:3)为萃取溶剂,样品用量5mL,萃取剂用量5mL,加入0.75gNaCl,萃取时间2min,先在酸性条件下萃取一次,在萃取后的水相中加入1.5gK2HPO4,再重复萃取一次,然后合并两次的萃取液。在低于70℃水浴中将萃取液挥发至干,用1.0mL流动相溶解残留物。所建立的样品预处理方法使尿样中六种待测组分得到同时提取,提取效率均达到90%以上研究结果表明,所建立的高效液相色谱同时测定尿样中芳香族化合物六种代谢产物的方法灵敏度高、分析速度快、分析性能好、成本较低,能够满足尿样中有害物质代谢产物生物监测工作的需要。
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