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白藜芦醇是具有抗病及多种保健功能的芪类次生代谢物,胡萝卜则是富含β胡萝卜素等多种营养成分的重要蔬菜,本研究着眼于创建具有白藜芦醇保健功能的胡萝卜新种质资源,在构建花生cDNA文库的基础上,筛选RS基因;构建适于胡萝卜遗传转化的RS基因表达载体,应用农杆菌介导的遗传转化方法,开展葡萄RS基因的胡萝卜遗传转化,获得转基因植株,从而为筛选具有较高保健功能的胡萝卜新种质资源以及相关代谢途径的分子生物学、分子生态学研究奠定基础。主要研究结果如下: 1) 从富含白藜芦醇的花生“金花1012”幼果中提取总RNA,所获得RNA的A260/A280比值为1.89,A260/A230比值为2.03,达到了用以构建cDNA文库的质量要求;采用SMARTTM cDNA文库构建试剂盒,构建了花生幼果cDNA文库,其滴度达到了1×106pfu/ml,重组率达到99%以上。 2) 采用基于PCR技术的96孔板cDNA文库筛选法,利用RS基因高度保守序列设计的引物,筛选cDNA文库获得了2个RS基因的阳性cDNA克隆。同源分析结果表明,该两个cDNA相互间的碱基序列有94%的同源性,与已经报道的花生RS基因cDNA有90%以上的同源性。推测上述两个阳性克隆是花生RS多基因家族不同成员的cDNA。 3) 利用功能已经鉴定的葡萄RS基因cDNA和表达载体pCB,构建了适用于胡萝卜等双子叶植物遗传转化的表达载体。 4) 建立了高效的胡萝卜农杆菌介导的遗传转化与再生体系,利用该体系开展了胡萝卜的遗传转化,获得了200个以上的转基因植株和可望进一步获得100个以上转基因植株的抗性胡萝卜愈伤组织。上述转基因植株和抗性愈伤已经通过了GUS与PCR检测。