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目的：筛选并鉴定鼻咽癌细胞中组织蛋白酶D (Cathepsin D, CTSD)的相互作用蛋白，初步了解CTSD在鼻咽癌侵袭转移中的作用及机制。方法：收集高转移鼻咽癌5-8F细胞的总蛋白，采用免疫共沉淀结合凝胶电泳分离CTSD相互作用蛋白，应用电喷雾四级杆飞行时间串联质谱鉴定相互作用蛋白，结合基因本体论、功能聚类、信号通路、蛋白质相互作用网络分析等生物信息学方法综合分析CTSD相互作用蛋白，采用免疫共沉淀结合Western blot方法对CTSD相互作用蛋白EGFR、HSP90A进行验证。结果1、采用免疫共沉淀结合质谱方法筛选并鉴定了143个CTSD相互作用蛋白。2、将143个CTSD相互作用蛋白进行功能聚类分析显示：其中70个CTSD相互作用蛋白根据功能聚为12类，主要涉及到以下几个方面：跨膜运输、细胞骨架、氧化磷酸化、蛋白质合成、细胞凋亡、信号转到、氧化还原酶活性、分子伴侣、糖代谢等。另外73个CTSD相互作用蛋白未参与聚类。3、将143个CTSD相互作用蛋白进行GO分析，结果如下：GO_BP分析显示CTSD相互作用蛋白生物学过程主要涉及到应激反应、负调控、代谢过程、运输过程、蛋白定位及转运过程；GO_MF分析显示CTSD相互作用蛋白分子功能主要涉及到蛋白结合、催化活性、嘌呤核苷酸绑定、核苷酸结合、细胞骨架、氧化还原酶活性、结构分子活性等；GO_CC分析显示CTSD相互作用蛋白亚细胞定位于膜、细胞器、囊泡、高分子复合物中等。4、KEGG和Biocarta信号通路分析显示：143个CTSD相互作用蛋白涉及2条Biocarta信号通路包括低氧诱导因子相关信号通路，端粒、端粒酶、细胞老化；9条KEGG信号通路：氧化磷酸化、丙酮酸代谢、糖酵解信号通路、粘附连接、抗原处理和递呈、丙酸代谢、核糖体信号通路、磷酸戊糖信号通路。5、蛋白质相互作用网络分析显示：EGFR、HSP90A蛋白与CTSD形成相互作用组。6、应用免疫共沉淀结合Western blot显示EGFR、HSP90A与CTSD结合，验证了质谱结果的可靠性。结论1、本研究采用免疫共沉淀结合质谱分析在鼻咽癌细胞中鉴定了143个CTSD的相互作用蛋白，为进一步研究CTSD蛋白的功能提供了实验依据。2、生物信息学综合分析发现，EGFR、HSP90A蛋白与CTSD在鼻咽癌细胞中形成相互作用组，可能在鼻咽癌侵袭转移中发挥重要作用。3、应用免疫共沉淀结合Western blot对其中2个CTSD相互作用蛋白质EGFR、HSP90A进行了验证，与质谱结果一致，提示质谱结果的可靠性。