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我们设想细胞与基质之间的相互作用可能在肿瘤耐药中起重要作用,因此本课题探讨了主要由粘附分子β-1int介导的肿瘤细胞与ECM相互作用及阻断其功能对其耐药的影响。首先采用不同浓度ADR，逐渐增加剂量的方法,获得了较典型的A549-ADR细胞株,其IC50达到7.45μg/ml,而A549 IC50为0.085μg/ml, 抗药性提高了87.65倍,交叉药敏实验则表现出典型的多向耐药性。在此基础上采用免疫组化的方法检测了A549以及A549-ADRβ-1int的表达,发现耐药细胞株表达明显高于敏感株(p<0.01), 提示其高表达本身就可能是一种耐药表型。为了进一步探讨产生耐药的原因,进行MTT实验,证明了β-1int与FN结合后可以使细胞产生抗药性,同时耐药细胞的抗药性得以强化;用抗β-1int抗体阻断细胞与FN的作用后,一定程度恢复了对药物的敏感性。此外还采用TUNEL法检测细胞凋亡,证明了β-1int与FN的结合可以抵抗化疗药物诱导的凋亡, 而阻断β-1int功能则可以恢复对药物的敏感性,提示破坏肿瘤细胞与ECM相互作用可以逆转细胞耐药。为探讨β-1int与ECM相互作用产生抗凋亡能力的机理,本研究用流式细胞仪检测了凋亡基因Bcl-2，Bax的表达,结果发现,当耐药细胞通过β1int与FN结合后导致Bcl-2基因蛋白表达上升(62.08%),而Bax表达则有降低的趋势(14.79%),但当阻断β1int后, Bcl-2表达明显下降 (23.59%),而Bax表达则有上升的趋势(75.83%),两者正好相反.提示细胞与细胞外基质作用后可以调节凋亡基因的表达而使细胞免于高凋亡率,敏感细胞也有这种特征,说明细胞与ECM结合本身就能影响Bcl-2,Bax的表达,从而加强肿<WP=8>瘤细胞的耐药性,并非耐药细胞独有的特性。为了探讨细胞-ECM相互作用对细胞周期的影响,将细胞与基质结合,再阻断β1int的功能,结果发现,耐药细胞(Dip G1:50.77%)以及耐药细胞与FN结合后(Dip G1:52.3%),其细胞大量堆积在G1期.而阻断β1int的功能,阻止细胞与细胞外基质作用后，G1期细胞迅速进入Ｓ期(Dip G1:42.16%).前者与阻断β1int实验组相比，G1期细胞数高10.24%,提示肿瘤细胞与细胞外基质的结合，使细胞在G1期滞留，延缓了细胞周期的进程，这可能是造成细胞耐药的原因之一。通过本课题研究,我们得出如下结论:粘附分子β1int与ECM的结合是肿瘤细胞产生耐药的原因之一;β1int与ECM作用主要通过抑制细胞凋亡以及影响细胞周期产生耐药;β1int与ECM作用可以上调凋亡基因Bcl-2表达，下调Bax表达;耐药肿瘤细胞β1in表达增加,成为其耐药表型;阻断β1int与ECM作用可以逆转肿瘤耐药。