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目的:脑胶质瘤是中枢神经系统中的原发性颅脑内肿瘤,并且具有较高的恶性程度。在胶质瘤的治疗上包含了多种方法,例如,放疗、化疗以及手术等治疗方法,但其治疗效果并不理想,复发率仍然很高。上游开放阅读框(uORF)是位于真核mRNA 5’非翻译区(5’UTR)的翻译起始元件,研究发现,uORF在肿瘤中表达异常,并参与各种在肿瘤发生以及发展中的过程。在整个真核生物的基因组中,与没有uORF的基因相比,含有uORF的基因在CDS区域中表现出更低的翻译效率,uORF通过滞留核糖体或与mRNA解离,抑制下游CDS区的翻译起始速率。本研究旨在研究以TFAP4-66aa-uORF为起点的揭示了调控胶质瘤细胞生物学行为的新机制,即TFAP4-66aa-uORF是否通过抑制TFAP4的表达,进而抑制TFAP4/LINC00520/miR-520f-3p反馈环路,抑制胶质瘤细胞的恶性生物学行为。研究方法:人胶质瘤U87和U251细胞以及HEK293T细胞进行培养。Real-time PCR实验检测LINC00520和miR-520f-3p在胶质瘤组织及细胞中的表达。Western blot实验检测66aa-uORF、TFAP4和LASP1在胶质瘤中蛋白的表达水平。运用CCK-8实验法、Transwell实验方法、以及流式细胞仪检测法检测胶质瘤细胞的恶性生物学行。构建TFAP4-66aa-uORF过表达质粒、LINC00520沉默质粒以及miR-520f-3p、TFAP4和LASP1过表达和沉默质粒。RIP实验验证66aa与TFAP4 mRNA存在结合。双荧光素酶基因报告系统检测LINC00520和mi R-520f-3p、mi R-520f-3p和TFAP4的靶向结合作用。ChIP实验表明TFAP4分别与LINC00520、LASP1的启动子区存在结合。裸鼠移植瘤实验检测TFAP4-66aa-uORF、TFAP4和LINC00520对细胞移植瘤体的生长情况和裸鼠生存率的影响。结果:TFAP4-66aa-uORF在胶质瘤组织和细胞中低表达。过表达TFAP4-66aa-uORF能够显著抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,但促进细胞凋亡率。TFAP4在胶质瘤组织和细胞中表达上调,TFAP4的过表达可以显著地增强胶质瘤细胞的恶性生物学行为。66aa通过与TFAP4 mRNA的结合抑制TFAP4的表达。LASP1在胶质瘤组织和细胞中高表达,LASP1过表达后能够有效的促进恶性胶质瘤细胞的生物学行为。LINC00520在胶质瘤中高表达,沉默LINC00520能够显著抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,但促进细胞的凋亡率。miR-520f-3p在胶质瘤中发挥抑癌基因的作用,沉默miR-520f-3p促进胶质瘤细胞的恶性生物行为。LINC00520靶向结合miR-520f-3p,沉默miR-520f-3p能够逆转单独沉默LINC00520对胶质瘤细胞恶性生物学行为的抑制作用。mi R-520f-3p与TFAP4 mRNA3’UTR区域具有特异性结合位点,TFAP4的过表达能够逆转由单独过表达miR-520f-3p对胶质瘤细胞的恶性生物学行为的抑制的作用。沉默LINC00520通过负性调控mi R-520f-3p,进而抑制TFAP4的表达。TFAP4与LINC00520的启动子区存在结合,转录激活其表达,形成TFAP4/LINC00520/miR-520f-3p正反馈环路。TFAP4与LASP1的启动子相结合,转录激活LASP1的表达。miR-520f-3p通过与TFAP4 m RNA 3’UTR区结合抑制LASP1的表达。沉默LINC00520通过调控TFAP4,进而抑制LASP1的表达。沉默LINC00520、TFAP4,过表达TFAP4-66aa-uORF的单独和联合应用抑制裸鼠肿瘤瘤的生长,延长裸鼠生存期。结论:1.TFAP4-66aa-uORF和miR-520f-3p在胶质瘤组织和细胞中表达下调,TFAP4、LASP1和LINC00520在胶质瘤组织和细胞中高表达。过表达TFAP4-66aa-uORF、miR-520f-3p以及沉默LINC00520、TFAP4、LASP1能够显著的抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。2.66aa结合TFAP4 mRNA,抑制TFAP4的翻译。3.LINC00520结合miR-520f-3p。miR-520f-3p与TFAP4 mRNA的3’UTR区相结合。沉默LINC00520通过结合miR-520f-3p,减弱miR-520f-3p对TFAP4负性调控作用,进而抑制胶质瘤细胞的恶性生物学行为。TFAP4与LASP1和LINC00520的启动子区相结合,转录激活LASP1和LINC00520的表达,形成反馈环路,调节胶质瘤细胞的生物学行为。4.TFAP4-66aa-uORF通过抑制TFAP4的表达,进而抑制TFAP4/LINC00520/miR-520f-3p反馈环路,在调节胶质瘤细胞的生物学行为中发挥重要作用。