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目的:探讨研究结核杆菌Pup-蛋白酶体系统中Pup、Dop、Paf A和Mpa基因的过表达对新疆地区流行耐药结核杆菌临床分离株耐药性的影响。方法:构建及鉴定重组穿梭质粒p MV361/Pup、p MV361/Dop、p MV361/Paf A和p MV361/Mpa,利用电穿孔技术将重组穿梭质粒p MV361/Pup、p MV361/Dop、p MV361/Paf A和p MV361/Mpa分别电转化至结核杆菌药物敏感菌株、单纯耐一线抗结核药物(异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇)的结核杆菌临床分离株、耐多药的结核杆菌临床分离株,利用实时荧光定量PCR技术检测及鉴定Pup-蛋白酶体系统中Pup、Dop、Paf A和Mpa基因过表达的结核杆菌药物敏感菌株、单纯耐一线抗结核药物(异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇)的结核杆菌菌株、耐多药的结核杆菌菌株。利用显色法测定MIC值,检测及分析Pup-蛋白酶体系统中Pup、Dop、Paf A和Mpa基因的过表达对新疆地区流行的结核杆菌药物敏感菌株、单纯耐一线抗结核药物(异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇)的结核杆菌临床分离株、耐多药的结核杆菌临床分离株耐药性的影响。结果:利用显色法测定Pup、Dop、Paf A和Mpa基因过表达的各结核杆菌菌株的MIC值,结果显示:与原始菌株相比,①过表达Pup基因的耐多药结核杆菌菌株和单纯耐一线抗结核药物的结核杆菌菌株MIC值降低。②过表达Dop基因、过表达Paf A基因和过表达Mpa基因的耐多药结核杆菌菌株和单纯耐一线抗结核药物的结核杆菌菌株MIC值均升高。③过表达Pup基因、过表达Dop基因、过表达Paf A基因和过表达Mpa基因的结核杆菌药物敏感菌株仍对异烟肼和利福平敏感。④单纯导入质粒p MV361不会影响结核杆菌药物敏感菌株、单纯耐一线抗结核药物(异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇)的结核杆菌菌株、耐多药的结核杆菌菌株的MIC值。结论:1、成功构建了重组穿梭质粒p MV361/Pup、p MV361/Dop、p MV361/Paf A和p MV361/Mpa;2、成功构建了结核杆菌Pup-蛋白酶体系统中Pup、Dop、Paf A和Mpa基因过表达的结核杆菌药物敏感菌株、单纯耐一线抗结核药物(异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇)的结核杆菌菌株、耐多药的结核杆菌菌株;3、MTB中Pup基因过表达可以使耐多药的结核杆菌菌株和单纯耐一线抗结核药物(异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇)的结核杆菌菌株的耐药性减弱;4、MTB中Dop、Paf A和Mpa基因过表达均可以使耐多药的结核杆菌菌株和单纯耐一线抗结核药物(异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇)的结核杆菌菌株耐药性增强;为进一步研究Pup-蛋白酶体系统对结核杆菌耐药性的调控作用机制奠定了基础。