NOS/NO在酒精致血管内皮损伤效应中的作用

来源 :南华大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:cscbob
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目的:本实验通过检测动物血清及细胞培养液中MDA、NO、NOS、ADMA等指标,从脂质过氧化与NO代谢等两条途径探讨酒精对血管内皮的损伤作用及其可能机制。方法:实验分为两个部分,即动物实验和细胞培养实验。动物实验选用SD大鼠(雄性、56只、体重约250g)灌胃给予不同剂量饮用酒(红星二锅头,1mL/100g),每天一次,连续2个月,建立酒精摄入的动物实验模型。实验分为7组(n=8)。(1)对照组,(2)低、中、高三个剂量的饮酒组(红星二锅头,14V/V、28V/V、56V/V),(3)高脂饮食组,(4)高脂饮食联合中剂量酒精组(28V/V),灌胃给予红星二锅头的同时,给予高脂饲料,(5)维生素E保护组,在(4)组基础上,每天给予维生素E(100mg/kg,灌酒前1h灌胃给予)。造模2个月后,按常规操作取动物血清,测定动物血清中血糖、总胆固醇、甘油三酯(分光光度法)、MDA(硫代巴比妥酸法)、NO(硝酸还原酶法)的含量与NOS(包括iNOS、eNOS、总NOS,生化法)的活性;并测定血清中ADMA(HPLC法)的含量,评价长期高剂量饮酒联合高脂饮食的心血管效应。细胞实验采用含10%小牛血清的DMEM培养基培养HUVEC-12细胞株。待细胞长至80%融合,换用1%小牛血清DMEM培养基同步化24h,用不同浓度的乙醇(0、25、50、100、200mmol/L)与细胞共培养,建立细胞实验模型。实验分组:(1)D-Hank’s对照组,(2)不同浓度乙醇处理组(25、50、100、200mmol/L),(3)H2O2阳性对照组(500μmol/L),(4)VitC保护组(100mg/L),在乙醇(100mmol/L)
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