塔城蜱病毒2的分离鉴定及流行病学研究

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近年来,随着宏基因测序技术快速发展及其在虫媒性疾病研究上的广泛应用,发现了很多未知的新病原,这些病原的发现对人和动物都有重要的公共卫生学意义。塔城蜱病毒2是2015年用宏基因组测序技术在媒介蜱中发现的新病毒,在分类上归属于菲纽病毒科,白蛉病毒属的一种单股负链RNA病毒。但目前还没有该病毒在人和动物中流行情况的报道,也缺乏对其病原学方面的深入研究。本研究从新疆地区亚洲璃眼蜱中分离到塔城蜱病毒2,进行病毒形态的电镜观察,扩增出一株塔城蜱病毒2的L片段和S片段全基因序列。利用该病毒的S片段N基因的表达蛋白作为抗原建立ELISA检测方法,对新疆部分地区牧民的血清样品开展了流行病学调查;利用半巢式RT-PCR方法,对牛、羊和媒介蜱感染病毒的情况进行调查。本研究初步反映了该病原在人、羊和蜱虫体内的流行情况,对这种新发蜱传性人兽共患病的监测、防控和预警具有重要意义。1.蜱研磨上清液感染的SMMC细胞传至第三代发生较明显的细胞病变,PCR检测结果与塔城蜱病毒2病毒序列相似度99%。电镜观察细胞培养的病毒,直径为90-100 nm的球形结构,符合布尼亚病毒典型的球形颗粒样形态特征。结果表明成功分离到塔城蜱病毒2。2.利用RT-PCR方法,对塔城病毒2的L片段及S片段进行全基因扩增测序和系统进化分析。测序结果表明该病毒的L片段包含6659个核苷酸,S片段包含2181个核苷酸。系统进化分析结果表明该病毒L片段和S片段分别与Gen Bank收录塔城蜱病毒2-TC252的相应片段相似性分别为98.8%和99.23%。表明该病毒株与2015年新疆地区发现的病毒同源,为同种病毒。3.对塔城蜱病毒2的S片段上的N蛋白进行了原核表达,用纯化的N蛋白作为抗原进行间接ELISA方法对新疆部分地区的牧民血清样品进行Ig M和Ig G检测。调查人群中塔城蜱病毒2的总体感染率为9.55%,有2.95%的人处于该病毒的感染早期。证明塔城蜱病毒2在牧民人群中有较高的感染率。4.利用半巢式RT-PCR对塔城蜱病毒2在动物和蜱虫的感染状况进行了调查,结果显示羊血样的检出率为4.23%;新疆部分地区蜱虫塔城蜱病毒2的总体带毒比率达到了11.95%,其中采集自马体的边缘革蜱感染率达到了55%,而采集自骆驼体表的亚洲璃眼蜱的感染率也达到了19.04%。结果表明,革蜱与璃眼蜱是塔城蜱病毒2的重要传播媒介,病毒存在于宿主血液中,可经媒介蜱传播给其他宿主。
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