【摘 要】
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目的:探讨加味孔圣枕中丹对卒中后抑郁（post-stroke depression,PSD）模型大鼠行为学和突触可塑性的影响,基于Netrin-1/DCC信号通路探讨本方抗卒中后抑郁的作用机制。方法:大脑中动脉阻塞法（Middle cerebral artery occlusion,MCAO）联合孤养及慢性温和不可预知应激（chronic unpredictable mild stress,CUM
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目的:探讨加味孔圣枕中丹对卒中后抑郁（post-stroke depression,PSD）模型大鼠行为学和突触可塑性的影响,基于Netrin-1/DCC信号通路探讨本方抗卒中后抑郁的作用机制。方法:大脑中动脉阻塞法（Middle cerebral artery occlusion,MCAO）联合孤养及慢性温和不可预知应激（chronic unpredictable mild stress,CUMS）建立PSD大鼠模型。mNSS评分评估神经功能缺损程度,TTC染色观察脑缺血;糖水偏好实验、尾部悬挂实验评价抑郁程度。实验大鼠给予CUMS 2w后,随机分为模型组、加味孔圣枕中丹组和氟西汀组,另设空白组（n=18）。给予加味孔圣枕中丹水煎液11.34g/kg、氟西汀混悬液2.1mg/kg体质量灌胃,空白组和模型组给予等量生理盐水灌胃,1次/d,持续28d。于CUMS 2、4、6w各时相点,糖水偏好实验、尾部悬挂实验、强迫游泳实验、旷场实验评价抑郁行为。HE染色、透射电镜及高尔基染色观察大鼠前额叶皮层神经元损伤以及突触结构可塑性变化;免疫荧光法观察前额叶皮层NF200表达;qRT-PCR和Western Blot检测前额叶皮层Netrin-1、DCC、FAK、Myosin II mRNA和蛋白表达。Pull Down技术检测小G蛋白RhoA、Rac1活性。结果:1.MCAO术后1w时,MCAO组大鼠体质量显著降低,mNSS评分显著升高（P＜0.01）,具有明显神经功能缺损;TTC染色显示有明显脑缺血梗死灶,提示MCAO模型制备成功。给予孤养+CUMS刺激2w,PSD模型组大鼠体质量明显减轻,糖水偏好率明显下降,悬尾不动时长明显升高（P＜0.01）,出现典型抑郁样行为,PSD模型制备成功。2.孤养+CUMS 2w、4w、6w时,与空白组比较,模型组大鼠体质量显著下降,糖水偏好率显著降低,悬尾不动时间显著延长,游泳绝望时长显著延长,旷场活动总距离显著减少,中央区域频次明显下降,中央区域活动距离显著减少,均有显著性差异（P＜0.01,P＜0.05）。CUMS 4、6w时,与模型组相比,加味孔圣枕中丹组大鼠糖水偏好率显著升高,悬尾不动时长和游泳绝望时长显著缩短,旷场活动总距离显著增加,中央区域频次显著上升,中央区域活动距离显著增加（P＜0.01,P＜0.05）。3.HE染色结果显示,模型组大鼠损伤侧前额叶皮层神经元层次变少,排列疏松,胞核溶解;加味孔圣枕中丹组大鼠前额叶皮层锥体神经元损伤有一定改善。4.透射电镜和高尔基染色结果显示,模型组突触间隙减小,突触后致密物（postsynaptic density,PSD）厚度变薄;树突棘排列稀疏,类型减少。加味孔圣枕中丹组大鼠突触间隙增宽,PSD厚度增加,前额叶皮层树突棘密度增加。5.NF200免疫荧光检测显示,与空白组比较,模型组大鼠前额叶皮层NF200表达显著下降（P＜0.01）。与模型组相比,加味孔圣枕中丹组大鼠NF200表达显著升高（P＜0.01）。6.qRT-PCR结果显示:与空白组相比,模型组大鼠前额叶皮层Netrin-1、DCC mRNA相对表达量明显降低（P＜0.01）;与模型组相比,加味孔圣枕中丹组大鼠前额叶皮层Netrin-1、DCC mRNA相对表达量明显升高（P＜0.01）。Western Blot结果显示,与空白组相比,模型组大鼠前额叶皮层Netrin-1、DCC蛋白相对表达量显著减少（P＜0.01）,p-FAK/FAK比值显著降低（P＜0.01）,Myosin II相对表达量显著升高（P＜0.01）;与模型组相比,加味孔圣枕中丹组大鼠前额叶皮层Netrin-1、DCC蛋白相对表达量明显升高（P＜0.05,P＜0.01）,p-FAK/FAK比值显著升高（P＜0.01）,Myosin II相对表达量明显降低（P＜0.01）。Pull Down结果显示,与空白组相比,模型组RhoA活性明显增加（P＜0.05）;与模型组相比,加味孔圣枕中丹组RhoA活性显著下降（P＜0.05）。结论:1.MCAO法合并孤养以及CUMS成功复制PSD模型,具有明显的脑缺血损伤和抑郁表征。2.加味孔圣枕中丹可明显改善PSD大鼠抑郁行为,具有明显的抗抑郁作用。3.加味孔圣枕中丹可明显减轻脑缺血叠加慢性应激诱导的神经元损伤和改善突触可塑性。4.加味孔圣枕中丹调控Netrin-1/DCC信号通路介导突触重塑改善PSD大鼠的抑郁表现和神经元损伤,这可能是本方治疗PSD的作用机制之一。
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