目的构建靶向抑制人骨硬化蛋白SOST的siRNA腺病毒,探究SOST基因在乳腺癌骨质破坏这一病理过程中的作用。方法1.设计带3个干扰片段的2对引物,扩增出两段PCR产物,以Gibson DNA Assembly的方式同时连接到腺病毒穿梭质粒pAdTrace-OK上。穿梭载体经与腺病毒骨架质粒同源重组,获得腺病毒质粒。该质粒再经HEK-293细胞包装获得SOST-siRNA腺病毒。以该病毒感染MDA-MB-231细胞,RT-PCR、ELISA检测其干扰效率。2.将MG-63成骨细胞与MDA-MB-231细胞间接共培养,以模拟乳腺癌细胞骨转移,同时采用Ad-siSOST腺病毒抑制MDA-MB-231细胞相应蛋白表达,检测MG-63细胞成骨能力的改变。结果1.成功获得带三个干扰片段的腺病毒穿梭质粒,经同源重组和包装后,获得腺病毒AdR-siSOST。感染乳腺癌细胞系MDA-MB-231后,能够明显抑制SOST的表达。2.与MDA-MB-231细胞共培养后,MG-63细胞成骨能力下降,说明在乳腺癌骨转移的微环境中,乳腺癌细胞可抑制成骨细胞的成骨分化;转染Ad-siSOST腺病毒后,其成骨能力好转,说明在这一过程中有SOST基因的参与。结论1.成功构建具有较高干扰效率的腺病毒AdR-siSOST。2.sclerostin蛋白参与了乳腺癌骨转移,阻断SOST的表达,可有效改善乳腺癌引起的骨质破坏。