腺病毒介导的slit2 shRNA转染缺氧诱导的人视网膜色素上皮细胞对VEGF表达的影响

来源 :重庆医科大学 重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zboboz
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目的:观察腺病毒介导的slit2shRNA转染缺氧诱导的人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cells RPE)对血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor VEGF)表达的影响,探讨slit2在脉络膜新生血管中的可能作用,为脉络膜新生血管(CNV)的治疗提供新的思路。方法:1.体外培养人RPE细胞,RT-PCR、免疫组化鉴定slit2及其受体在人RPE上的表达;2.200μmol/L氯化钴建立化学缺氧模型,未缺氧细胞作为空白对照组,Real-TimePCR,western-blot观察slit2及受体、VEGF在缺氧状态下的表达变化;3.将缺氧的RPE细胞随机分为Ad-shRNA(加入slit2shRNA),Ad-nμll(加入空腺病毒)、缺氧组。24h后收取细胞,Real-TimePCR、western-blot分别检测各组slit2及其受体、VEGF的mRNA和蛋白水平表达变化,ELISA检测上清中VEGF蛋白的表达变化。结果:1.在正常人RPE细胞,即有slit2及其受体Robo1、Robo4的表达;2.与空白对照组相比,缺氧组中slit2及其受体Robo1、VEGF的mRNA和蛋白水平的表达均明显增加(P<0.05);但受体R obo4无明显变化;3.与缺氧组相比,slit2shRNA转染后Ad-shRNA处理组的slit2、Robo1、VEGF的mRNA和蛋白水平表达均降低(P<0.05);4.缺氧组与Ad-nμll组之间slit2、Robo1、VEGF的变化无统计学意义(p>0.05);结论:研究表明slit2-Robo1信号通路参与了CNV的形成过程, slit2shRNA沉默RPE中slit2后,可明显抑制缺氧诱导的RPE中VEGF的表达,为临床CNV的治疗提供新的方向。
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