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目的:1.研究奥沙利铂是否通过HMGB1调节皮肤鳞癌细胞株自噬水平;2.研究奥沙利铂通过HMGB1调节自噬的通路对皮肤鳞癌细胞株活性的影响。方法:选用体外培养的人皮肤鳞癌A431细胞作为研究对象1.细胞分为两组,实验组利用不同浓度的奥沙利铂处理A431细胞,对照组不进行处理,进一步通过Western blotting检测细胞中自噬标志分子LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、p62水平变化;2.为明确HMGB1在奥沙利铂引起的A431细胞自噬中是否有改变,实验组用奥沙利铂处理后,通过Western blotting分别检测细胞内外HMGB1水平变化;3.两组细胞用不同方式处理,实验组用不同浓度的HMGB1处理,对照组未处理,通过Western blotting检测细胞中自噬标志分子LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、p62水平变化;4.为进一步验证HMGB1在A431细胞自噬中的作用,通过细胞转染技术实验组用HMGB1 sh RNA进行干扰,对照组用阴性对照sh RNA处理,进一步利用Western blotting检测HMGB1及自噬标志分子LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、p62水平变化;5.实验组通过CCK-8法检测A431细胞的细胞活性,一组单独用不同浓度奥沙利铂处理,另一组联合自噬抑制剂3-MA处理,对照组不做处理,以此明确奥沙利铂对A431细胞活性的影响;6.通过细胞转染技术用sh RNA进行干扰后,再用35mM奥沙利铂进行处理,CCK-8法检测HMGB1对奥沙利铂杀伤A431细胞活性的影响。结果:1.经不同浓度奥沙利铂处理后的细胞组自噬相关蛋白LC3II表达水平升高,LC3I表达水平变化不明显,LC3II/LC3I比值增大,同时p62表达下降,自噬水平升高,且此调节作用呈剂量依赖性方式。2.奥沙利铂处理A431细胞后细胞内HMGB1的表达增加,同时细胞外HMGB1的释放也增加。3.经HMGB1处理的细胞组较未处理组自噬相关蛋白LC3II表达水平升高,LC3I表达水平变化不明显,LC3II/LC3I比值增大,p62表达水平下降,自噬水平升高,且呈剂量依赖性方式。4.转染HMGB1 sh RNA组HMGB1表达水平较对照组明显降低,且LC3II、LC3I表达水平下降,LC3II/LC3I比值减小,p62表达增加,自噬水平降低。5.单独用不同浓度奥沙利铂处理的细胞组细胞活性明显低于对照组,随着浓度升高细胞活性越低;而联合3-MA处理组细胞活性低于单独奥沙利铂处理组。6.转染HMGB1 sh RNA组细胞活性明显低于对照组,对照组细胞存活率高于实验组。结论:1.奥沙利铂通过调节HMGB1水平来调控A431细胞的自噬水平;2.HMGB1负反馈调节A431细胞对奥沙利铂的敏感性;3.奥沙利铂通过HMGB1上调的自噬是A431细胞抵抗奥沙利铂的保护性机制。