制远志中细叶远志皂苷的提取分离及其对雌性小鼠抑郁症的作用研究

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远志Radix Polygala为常用中药,最早记载于《神农本草经》,被列为上品,并被视为养命要药。来源于远志科植物Polygala tenuifolia Willd或卵叶远志Polygala sibiricaL.的干燥根,主要产于东北、华北、西北和华中以及四川;生于草原、山坡草地、灌丛中以及杂木林下。远志味苦、辛,性温,归心、肾、肺经,具有安神益智、交通心肾,祛痰、消肿等功效。用于心肾不交引起的失眠多梦、健忘惊悸、神志恍惚,咳痰不爽,疮疡肿毒,乳房肿痛等症状。本论文在查阅大量参考文献的基础上,对远志的植物特征、药材性状、化学成分、药理作用、抑郁症等进行较为全面的综述,而后对远志进行两方面的实验研究。一方面是制远志中细叶远志皂苷的提取、分离,首先严格按照2010版(一部)《中国药典》所载的炮制方法,将远志用甘草进行炮制得到制远志。采用正交实验设计优选出制远志水提过程的最佳工艺,经过综合评价分析得出,A383C3为最佳提取工艺,即提取90min,加入12倍量的水,煎煮3次。将其水提醇沉后,再对大孔树脂、洗脱溶媒以及洗脱溶媒的用量进行筛选研究,确定出大孔树脂纯化制远志中总皂苷的最佳工艺,最终得出最佳工艺条件为AB8大孔吸附树脂纯化制远志总皂苷,洗脱溶媒及其用量为:蒸馏水、30%乙醇、70%乙醇各3BV以1BV/h速度依次洗脱,收集70%乙醇洗脱部位。利用大孔树脂分离出远志总皂苷,将其进行进一步的酸碱处理、萃取,经过硅胶柱层析分离得到细叶远志皂苷。并对远志的6种不同炮制品中细叶远志皂苷的含量进行测定,其结果为:朱砂制>姜制>酒制>甘草制>生远志>蜜制。另一方面是将提取出的细叶远志皂苷用于雌性小鼠抑郁症模型的研究。首先根据寇氏法明确细叶远志皂苷对雌性小鼠的LD5o值,确定细叶远志皂苷的剂量;然后采用孤养配合慢性轻度不可预见性应激刺激(CUMS)的方法建立雌性小鼠抑郁症动物模型,观察生物表征情况的变化,根据分组情况给雌性小鼠灌胃给药;而后采用SPSS17.0统计软件对行为学表现评价指标和生化评价指标进行LSD-t检验,数据进行统计处理。最后由行为学评价指标(体重变化、糖水偏好、旷场实验、游泳不动时间)和生化评价指标(单胺氧化酶MAO、促肾上腺皮质激素ACTH、皮质醇CORT)数据统计分析结果,实验结果表明,在行为学方面:细叶远志皂苷可以明显改善抑郁雌性小鼠的食欲情况,使雌性小鼠幸福指数增加,能改善雌性小鼠对外界的感兴趣程度,能明显减少绝望时间,增强雌性小鼠在危险状态下的求生欲望。在生化评价指标方面:细叶远志皂苷高、中剂量组可显著降低ACTH和CORT浓度,同时细叶远志皂苷高、中、低剂量组均能使MAO含量显著降低,说明细叶远志皂苷能有效改善雌性小鼠的抑郁症,同时其作用机制可能与调节下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)功能紊乱有关。本论文始终本着求真至善,开拓创新的精神,对实验的每个细节严格考察,分析制远志中细叶远志皂苷对雌性小鼠抑郁症的药理活性。对远志的炮制工艺,制远志中皂苷类成分的提取、分离部分进行了较为深入的化学成分研究,为今后远志的进一步研究奠定了物质基础;同时测定6种不同炮制品的细叶远志皂苷含量,为远志的质量控制研究提供了确实可靠的科学依据。更重要的是首次探索性地利用细叶远志皂苷对雌性小鼠的抑郁症模型进行研究,为远志的新药开发和临床用药提供重要的参考价值。
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