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睡眠是一个复杂的节律性生理过程,是我们日常生活中最熟悉的活动之一。良好的睡眠状态,对于人们工作和学习至关重要。随着现代生活方式的改变和工作压力的增加,“睡眠剥夺”问题困扰着越来越多的人。作为一种强烈的应激刺激,长期睡眠剥夺会继发性影响机体的多种生理机能,严重影响着人们的生活质量和身心健康。近几十年来,大量的研究集中在睡眠剥夺对机体的影响及其机制方面,取得了积极的成果。但由于睡眠剥夺引发的机体反应是一个动态的过程,对机体造成的损伤是多途径、多系统的,仅依靠几个指标远不能反映其全貌;且目前采用的如EEG等检测脑电活动的方法本身对机体是一种应激,容易对结果产生干扰。基于上述问题,我们希望采用一种相对全面、无刺激的方法来研究睡眠剥夺对机体产生的影响,从代谢组学的角度进行睡眠剥夺的研究,有利于认识它的危害并加以药物治疗。目前未见采用代谢组学方法研究睡眠剥夺的相关报道。因此,本课题拟建立人参皂苷干预的睡眠剥夺模型,从常规药理学及代谢网络调控角度入手,考察睡眠剥夺对机体的影响,探讨人参皂苷干预睡眠剥夺的物质基础与作用机制,主要实验内容和结果包括:
1.建立睡眠剥夺大鼠模型,通过Morris水迷宫实验、体重、摄食量、脾脏、胸腺、肾上腺重量及其指数、血浆ACTH、TSH和Cort水平、血清IL-1β、IL-2、IL-6和TNF-α水平及氧化应激等指标,考察睡眠剥夺对机体学习记忆能力、能量代谢水平、免疫系统、内分泌系统和机体抗氧化能力的影响,同时给予药物干预,人参皂苷干预组各项指标均优于模型组。
2.建立UPLC-MS法同时测定血浆中19种人参皂苷,采用建立的方法测定正常给药组和人参皂苷干预组大鼠血浆中人参代谢物成分的含量,经多维统计分析,发现睡眠剥夺后血浆中皂苷类物质代谢发生改变,其中人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rg1、F1、Rf、Rg3、C-K、Rh2、PD和PT的变化具有统计学意义。
3.采用大鼠血清和脑组织的代谢组学方法研究睡眠剥夺大鼠内源性代谢物的变化。经多维统计分析,模型组偏离正常组的趋势最大,人参皂苷干预组位于正常组和模型组中间。通过KEGG数据库检索发现,睡眠剥夺对机体的代谢途径影响较大的涉及能量代谢、蛋白质代谢、脂肪酸代谢、tRNA的合成及ABC转运蛋白等途径,并对机体矿物质、嘌呤代谢、NO代谢、谷胱甘肽代谢及机体氧化磷酸化水平等过程也有较大的影响,人参皂苷组可以显著改善这些内源性代谢物的含量。通过调节机体的代谢网络,人参皂苷发挥对神经、内分泌、免疫功能及物质代谢等生理功能的调节作用,降低睡眠剥夺产生的损害。