PCV2感染对小鼠肠道黏膜免疫的影响

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现阶段PCV2在世界范围内流行,给养猪业的健康发展带来巨大威胁,它不仅是断奶仔猪多系统衰竭综合征的病原,同时也会引起猪的生殖性疾病,导致出现PCV2相关性肺炎及相关性肠炎等。目前,在中国现有的养殖模式下,腹泻问题严重,PCV2引起的拉稀,食欲不振,消瘦问题普遍困扰着养殖户,给养殖业带来了巨大的经济损失。搞清楚PCV2是如何导致仔猪拉稀、腹泻是避免和治疗腹泻的重要的途径。在机体肠道中,其内环境的稳定与肠道黏膜免疫密切相关,因此本文就PCV2对肠道黏膜免疫的影响做了如下几个方面的研究。第一部分是探讨PCV2对肠道SIgA及相关细胞因子含量的影响,用PCV2感染5周龄昆明系小鼠,分别在感染后第7天,第14天,第21天,第28天,第35天和第42天时处死小鼠,取腹股沟淋巴结、脾脏、Peyer’s结做PCR鉴定,同时病毒接种细胞后进行蛋白鉴定,然后提取肠道中蛋白检测SIgA及与肠道密切相关的几个特征性细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ,检测其含量的变化。结果显示,随着感染时间的延长,试验组小鼠肠道SIgA,IL-2和IFN-γ含量均呈先升高后降低的趋势,IL-4和IL-10呈持续升高的趋势,本试验结果表明,小鼠肠道SIgA及相关细胞因子的含量在PCV2的刺激下发生了不同程度的改变,这些改变影响了肠道的免疫水平,使肠道的免疫水平发生了紊乱,最后导致肠道正常生理功能的损伤。第二部分是对肠道PCV2病毒载量与病理损伤之间相关性的研究,本实验利用PCV2感染的小鼠,通过采用SYBR Green I嵌合荧光法建立一种qPCR检测技术和石蜡切片HE染色方法,取感染后第7天,14天,21天,28天,35天,42天的肠组织进行qPCR检测,对病毒进行定量分析,同时对附着有Peyer′s结的肠组织进行切片的制作,染色观察肠道相关病理变化。结果显示小鼠肠道Peyer′s结可见淋巴细胞的坏死及缺失现象,轻度感染时,核溶解,核破裂面积小,出现细微的细胞缺失区;严重时出现大面积的细胞质溶解,核破裂,核溶解现象,在第14天及21天病毒含量高,淋巴细胞也伴随出现更严重坏死现象。
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