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目的：预测鉴定肿瘤抗原ROR1的H02Kd限制性CTL表位,制备胸腺肽α1修饰的表位多肽疫苗,观察多肽疫苗的抗肿瘤作用,为乳腺癌的免疫治疗奠定基础。方法：查询NCBI蛋白质库,获得小鼠肿瘤抗原ROR1的氨基酸序列,利用表位预测软件BIMAS及SYFPEITHI对小鼠肿瘤抗原ROR1的H-2Kd限制性CTL表位进行预测；根据预测结果,合成和纯化候选表位肽。流式细胞仪检测候选表位肽与H-2Kd分子的亲和力。选取亲和力较高的候选多肽与胸腺肽α1偶联制备多肽疫苗ROR1-Tα1。ELISA法检测RORl-Tα1体外刺激小鼠脾细胞产生释放的细胞因子IL-12以及IFN-γ。为研究多肽疫苗对小鼠的免疫保护作用,先用ROR1-Tα免疫BALB/c小鼠三次,每周一次。首次免疫后第7天,在小鼠右侧腋窝接种4T1乳腺癌细胞。末次免疫后3周将小鼠处死,剥离肿瘤,观察肿瘤大小。结果：使用表位预测软件BIMAS及SYFPEITHI进行预测,选取4条表位候选肽ROR1 716-724(DCPPRMYSL), ROR1 269-277 (SNPMILMRL), ROR1 788-796 (NYMFPSQGI), ROR1 591-599(DFLHIAIQI);合成上述4条表位多肽,高效液相色谱法分析显示多肽纯度i>95%。肽结合实验表明,随着表位多肽浓度增加,其与MHC-I类分子的亲和力亦逐渐增强,当表位多肽浓度达到30μmol/L的时候,4条表位多肽的荧光系数均>1.5,提示具有较高的亲和力。选取两个预测软件分析结果重叠的候选表位肽ROR1 591-599 (DFLHIAIQI)与胸腺肽α1进行偶联合成ROR1-Tα1多肽疫苗。ELISA结果表明ROR1-Tα1疫苗能有效促进小鼠T淋巴细胞的IL-12及IFN-γ的合成分泌,体外具有生物学活性。免疫保护实验结果显示,ROR1-Tα1组肿瘤生长速度较对照组生长慢且肿瘤平均重量明显小于对照组,提示ROR1-Tα1多肽疫苗对荷瘤小鼠具有明显的免疫保护效应。结论：通过预测软件获得与H-2Kd分子具有较高亲和力的候选表位多肽,经胸腺肽α1修饰制备ROR1-Tα1多肽疫苗,体外具有生物学活性,体内对荷瘤小鼠具有明显的免疫保护效应。为进一步研究乳腺癌的免疫治疗奠定了基础。