本文建立了一种采油用生物表面活性剂生产菌的筛选方法，筛选到菌株sy3，鉴定为铜绿假单孢菌(Pseudomonas aeruginosa)。菌株sy3在烃基培养基和非烃基培养基中培养，分别使培养液的界面张力和表面张力下降91.7％和55.1％，具有典型的生物表面活性剂特征。通过对菌株sy3的代谢产物进行分析，证明菌株sy3能够产生生物表面活性剂，其主要成分为鼠李糖脂，但也含有氨基酸类脂和磷脂类生物表面活性剂。菌株sy3摇瓶发酵生物表面活性剂的产量为8.0g/L，是一株潜在的生物表面活性剂生产菌。　　 采用环境压力选择方法对菌株sy3进行处理，富集能够耐受高浓度生物表面活性剂的自发突变株。在连续处理四周，菌体致死率超过90％的条件下，筛选到了一株耐受高浓度生物表面活性剂的自发突变株sy3-322；经发酵检测证明，sy3-322菌株是一株鼠李糖脂高产突变菌株；其摇瓶发酵的鼠李糖脂的产量达到12.5g/L，比出发菌株的8g/L提高了56％。对菌株sy3-322的摇瓶发酵培养基碳、氮源进行了优化，采用正交试验确定了最佳发酵培养基。在最适摇瓶发酵条件下，菌株sy3-322的鼠李糖脂发酵产量达到27g/L。　　 分别采用在7L和25L的自控发酵罐，研究了菌株sy3-322的生物表面活性剂发酵工艺，发现菌株sy3-322生物表面活性剂发酵属于生长相关型。创新性的提出了主从双发酵罐系统的发酵模式，成功的解决了生物表面活性剂发酵过程中的泡沫溢出液问题。采用溶氧系数相同法进行了从7L罐到25L罐的放大，结果证明是可行的。采用上述条件，在7L罐和25L罐上进行了13个批次的发酵，鼠李糖脂的最高产量达到27.5g/L，在25L自动发酵罐上，鼠李糖脂的产量平均达到24.2g/L。