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背景及目的：
子宫肌瘤是女性生殖器官最常见的良性肿瘤，但其发病机制及发生发展的分子生物学基础尚不明确。大量研究表明DNA甲基化、组蛋白修饰和microRNAs(miRNAs)三大主要的表观遗传学改变在子宫肌瘤的基因表达调控中发挥重要作用。已有研究证实子宫肌瘤及瘤旁对照肌层组织中均存在不同程度的DNA甲基化水平的改变，且相关基因启动子区异常甲基化，不仅涉及子宫肌瘤的发病机制，还可作为特征性生物标志物以及潜在的治疗靶点。本研究目的为通过检测子宫肌瘤及瘤旁对照肌层组织中甲基化CpG结合蛋白家族(methyl-CpG binding domain proteins，MBDs)的mRNA水平及蛋白水平的表达情况，从MBDs家族成员中筛选存在表达差异的MBD2基因；检测子宫肌瘤及瘤旁对照肌层组织中MBD2基因启动子区甲基化状态；采用体外功能实验分析MBD2表达下调对子宫肌瘤生物学行为的影响，分析MBD2蛋白表达与子宫肌瘤患者临床和病理资料的相关性，以初步探讨MBD2在子宫肌瘤发生发展中的可能机制，为子宫肌瘤患者的诊治提供理论依据。
方法：
收集我院具有子宫肌瘤手术指征并行子宫切除术患者的子宫肌瘤及瘤旁对照肌层组织标本共51对(术后均由我院病理科证实)。(1)采用实时荧光定量PCR(q-PCR)检测子宫肌瘤及瘤旁对照肌层组织中MBDs(MeCP2、MBD1、MBD2、MBD3、MBD4、MBD5和MBD6)的mRNA表达。(2)利用Westernblotting检测MBDs在子宫肌瘤及瘤旁对照肌层组织中的蛋白水平表达情况。(3)利用飞行时间质谱技术对子宫肌瘤及瘤旁对照肌层组织中MBD2基因启动子区CpG位点进行甲基化研究，探讨子宫肌瘤及瘤旁对照肌层组织中MBD2差异表达是否与其基因启动子区甲基化改变有关。(4)采用慢病毒包装MBD2真核过表达载体，通过转染至293T细胞，检测293T细胞的增殖、凋亡及周期情况。(5)收集与MBD2蛋白表达匹配的子宫肌瘤患者的临床和病理资料，分析MBD2蛋白表达与子宫肌瘤患者的临床和病理资料的相关性。(6)应用SPSS19.0和GraphPadPrism5软件包进行数据整理分析，正态分布两独样本均数比较采用t检验，多独立样本采用Tukey检验；非正态分布或分布未知配对资料采用Mann-WhitneyU非参数秩和检验或Wilcoxon秩和检验。计数资料用率(%)表示，计数非等级资料采用Pearsonχ2检验或Fish确切概率法χ2检验，计数等级资料采用Mann-WhitneyU或Kruskal-WallisH非参数秩和检验。所有的统计检验均为双侧检验，以p<0.05为差异有统计学意义。
结果：
1.q-PCR结果：与瘤旁对照肌层组织相比，在子宫肌瘤组织中，MBDs家族成员MBD2mRNA表达下调差异显著(p=0.015)，MBDs家族其他成员(MeCP2、MBD1、MBD3、MBD4、MBD5和MBD6)mRNA表达差异均无统计学意义(p均>0.05)。
2.Westernblotting结果：与瘤旁对照肌层组织比较，在子宫肌瘤组织中，MBDs家族成员MBD2和MBD6蛋白表达下调差异显著(分别为p=0.022和p=0.018)，MBDs家族其他成员(MeCP2、MBD1、MBD3、MBD4和MBD5)蛋白表达差异均无统计学意义(p均>0.05)。
3.质谱结果：51份标本中5对标本因样本量过少无法分析，共46对标本的MBD2基因启动子区的10个CpG位点进行了甲基化分析。分别以子宫肌瘤为病例组，瘤旁对照肌层组织为对照组；子宫肌瘤组织中mRNA低表达组为病例组，瘤旁对照肌层组织中mRNA低表达组为对照组；子宫肌瘤组织中mRNA高表达组为病例组，子宫肌瘤组织中mRNA低表达组为对照组；进行MBD2基因10个CpG位点的甲基化率对比分析。单点甲基化水平分析中，所有CpG位点上，病例组与对照组比较差异均无统计学意义(p均>0.05)。
4.MBD2真核过表达载体(pLV[Exp]-Puro-CMV>hMBD2)成功转染293T细胞，过表达MBD2的表达对293T细胞的增殖、凋亡和周期均无显著影响。
5.MBD2蛋白表达与子宫肌瘤患者临床和病理资料的相关性：对与MBD2蛋白表达匹配的具有完整临床病理资料的51例子宫肌瘤患者进行统计学分析。将所有患者分为两组：MBD2高表达组和MBD2低表达组，结果显示MBD2蛋白的表达与子宫肌瘤患者的临床病理特征均无明显相关性(p均>0.05)。
结论：
1.与瘤旁对照肌层组织相比，子宫肌瘤组织中存在MBD2mRNA和蛋白、MBD6蛋白的差异性表达下调。
2.子宫肌瘤组织中MBD2基因的表达下调与其基因启动子区甲基化状态可能无关。
3.MBD2表达下调在子宫肌瘤的发生发展中可能仅是伴随现象，并不存在因果关系。
4.MBD2蛋白的表达与子宫肌瘤患者的临床病理特征无明显相关性。
5.MBD2是否参与子宫肌瘤的发生发展仍有待子宫肌瘤原代细胞或其他细胞系的进一步探究。
子宫肌瘤是女性生殖器官最常见的良性肿瘤，但其发病机制及发生发展的分子生物学基础尚不明确。大量研究表明DNA甲基化、组蛋白修饰和microRNAs(miRNAs)三大主要的表观遗传学改变在子宫肌瘤的基因表达调控中发挥重要作用。已有研究证实子宫肌瘤及瘤旁对照肌层组织中均存在不同程度的DNA甲基化水平的改变，且相关基因启动子区异常甲基化，不仅涉及子宫肌瘤的发病机制，还可作为特征性生物标志物以及潜在的治疗靶点。本研究目的为通过检测子宫肌瘤及瘤旁对照肌层组织中甲基化CpG结合蛋白家族(methyl-CpG binding domain proteins，MBDs)的mRNA水平及蛋白水平的表达情况，从MBDs家族成员中筛选存在表达差异的MBD2基因；检测子宫肌瘤及瘤旁对照肌层组织中MBD2基因启动子区甲基化状态；采用体外功能实验分析MBD2表达下调对子宫肌瘤生物学行为的影响，分析MBD2蛋白表达与子宫肌瘤患者临床和病理资料的相关性，以初步探讨MBD2在子宫肌瘤发生发展中的可能机制，为子宫肌瘤患者的诊治提供理论依据。
方法：
收集我院具有子宫肌瘤手术指征并行子宫切除术患者的子宫肌瘤及瘤旁对照肌层组织标本共51对(术后均由我院病理科证实)。(1)采用实时荧光定量PCR(q-PCR)检测子宫肌瘤及瘤旁对照肌层组织中MBDs(MeCP2、MBD1、MBD2、MBD3、MBD4、MBD5和MBD6)的mRNA表达。(2)利用Westernblotting检测MBDs在子宫肌瘤及瘤旁对照肌层组织中的蛋白水平表达情况。(3)利用飞行时间质谱技术对子宫肌瘤及瘤旁对照肌层组织中MBD2基因启动子区CpG位点进行甲基化研究，探讨子宫肌瘤及瘤旁对照肌层组织中MBD2差异表达是否与其基因启动子区甲基化改变有关。(4)采用慢病毒包装MBD2真核过表达载体，通过转染至293T细胞，检测293T细胞的增殖、凋亡及周期情况。(5)收集与MBD2蛋白表达匹配的子宫肌瘤患者的临床和病理资料，分析MBD2蛋白表达与子宫肌瘤患者的临床和病理资料的相关性。(6)应用SPSS19.0和GraphPadPrism5软件包进行数据整理分析，正态分布两独样本均数比较采用t检验，多独立样本采用Tukey检验；非正态分布或分布未知配对资料采用Mann-WhitneyU非参数秩和检验或Wilcoxon秩和检验。计数资料用率(%)表示，计数非等级资料采用Pearsonχ2检验或Fish确切概率法χ2检验，计数等级资料采用Mann-WhitneyU或Kruskal-WallisH非参数秩和检验。所有的统计检验均为双侧检验，以p<0.05为差异有统计学意义。
结果：
1.q-PCR结果：与瘤旁对照肌层组织相比，在子宫肌瘤组织中，MBDs家族成员MBD2mRNA表达下调差异显著(p=0.015)，MBDs家族其他成员(MeCP2、MBD1、MBD3、MBD4、MBD5和MBD6)mRNA表达差异均无统计学意义(p均>0.05)。
2.Westernblotting结果：与瘤旁对照肌层组织比较，在子宫肌瘤组织中，MBDs家族成员MBD2和MBD6蛋白表达下调差异显著(分别为p=0.022和p=0.018)，MBDs家族其他成员(MeCP2、MBD1、MBD3、MBD4和MBD5)蛋白表达差异均无统计学意义(p均>0.05)。
3.质谱结果：51份标本中5对标本因样本量过少无法分析，共46对标本的MBD2基因启动子区的10个CpG位点进行了甲基化分析。分别以子宫肌瘤为病例组，瘤旁对照肌层组织为对照组；子宫肌瘤组织中mRNA低表达组为病例组，瘤旁对照肌层组织中mRNA低表达组为对照组；子宫肌瘤组织中mRNA高表达组为病例组，子宫肌瘤组织中mRNA低表达组为对照组；进行MBD2基因10个CpG位点的甲基化率对比分析。单点甲基化水平分析中，所有CpG位点上，病例组与对照组比较差异均无统计学意义(p均>0.05)。
4.MBD2真核过表达载体(pLV[Exp]-Puro-CMV>hMBD2)成功转染293T细胞，过表达MBD2的表达对293T细胞的增殖、凋亡和周期均无显著影响。
5.MBD2蛋白表达与子宫肌瘤患者临床和病理资料的相关性：对与MBD2蛋白表达匹配的具有完整临床病理资料的51例子宫肌瘤患者进行统计学分析。将所有患者分为两组：MBD2高表达组和MBD2低表达组，结果显示MBD2蛋白的表达与子宫肌瘤患者的临床病理特征均无明显相关性(p均>0.05)。
结论：
1.与瘤旁对照肌层组织相比，子宫肌瘤组织中存在MBD2mRNA和蛋白、MBD6蛋白的差异性表达下调。
2.子宫肌瘤组织中MBD2基因的表达下调与其基因启动子区甲基化状态可能无关。
3.MBD2表达下调在子宫肌瘤的发生发展中可能仅是伴随现象，并不存在因果关系。
4.MBD2蛋白的表达与子宫肌瘤患者的临床病理特征无明显相关性。
5.MBD2是否参与子宫肌瘤的发生发展仍有待子宫肌瘤原代细胞或其他细胞系的进一步探究。