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凋亡也称为程序性死亡,分为外源性和内源性两种途径。准确的凋亡模式对于细胞数量的动态平衡、组织器官的发育和机体系统分化是非常重要的。活性氧(ROS)作为新陈代谢的产物在细胞中不断产生和清除,并在凋亡途径中扮演重要角色。ASPP家族蛋白通过对p53特异性激活或抑制,从而诱导或阻碍细胞凋亡,并与肿瘤的发生和抑制关系密切。此外,ASPP家族蛋白的过表达能够影响肿瘤细胞对抗肿瘤药物的耐受性,而很多抗肿瘤药物被证实能够诱导胞内ROS的产生。这暗示着ASPP家族蛋白和ROS之间可能存在密切关系。本研究旨在探索ROS诱导肿瘤细胞凋亡的信号途径和ASPP家族在ROS诱导的肿瘤细胞凋亡中扮演的角色,以期进一步完善ROS胞内信号途径和了解ASPP家族蛋白影响细胞的相关机制,并为实现抗肿瘤治疗提供新的思路。首先构建pEGFP-N1-ASPP2和pEGFP-N1-iASPP两种表达质粒,利用H202构建HepG2细胞内高ROS环境,并通过细胞转染过表达ASPP家族蛋白,分别研究H202降低细胞活性的机理,以及过表达的ASPP家族蛋白在高ROS水平下对细胞活性的影响。实验结果如下：(1)H2O2能够有效提高细胞内的氧化压力,并通过凋亡途径,抑制HepG2的细胞活性；p53、Bax、Bak、 cytochrome c等的表达得到上调,Bcl-2、Bcl-xL等的表达得到下调,并且Caspase-3和Caspase-9的活性得到提高；(2)ASPP家族蛋白的过表达对细胞内氧化还原水平没有影响；其中ASPP2的过表达能够有效促进H202诱导的细胞凋亡,并增强H2O2对Bax、Bak等蛋白表达量的上调、对Bcl-2蛋白表达量的下调以及对Caspase酶活性的提高等影响。而iASPP的作用与之相反。结果表明：(1)H2O2导致胞内ROS的增加,通过线粒体介导的途径诱导HepG2细胞凋亡,涉及到对凋亡相关蛋白表达水平的影响、cytochrome c的释放和Caspase家族的激活等；(2)在ROS诱导的p53野生型肿瘤细胞HepG2的凋亡途径中,ASPP2和iASPP分别扮演着凋亡促进者和抑制者的角色。ROS在凋亡中的作用,一定程度上是通过ASPP家族蛋白来实现的,ASPP2和iASPP的平衡对于细胞具有非常重要的意义。