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目的通过研究Btk、NFκB在急性白血病患者白血病细胞中的表达,评价其表达水平的变化在急性白血病(ALL、AML)发生、发展、疾病转归及疗效判断中的作用；同时研究Btk抑制剂PCI-32765联合NFκB抑制剂Bortezomib对B细胞肿瘤细胞系Raji、Ramos细胞的增殖、凋亡的影响及可能作用机制的探索,以探讨Btk及NFκB抑制剂用于B细胞肿瘤治疗的可行性。方法1.ALL及AML患者白血病细胞实验：采用Ficoll密度梯度离心法分离不同病期的35例ALL、14例AML患者骨髓单个核细胞标本,利用RT-PCR、 Western blot分别从mRNA水平及蛋白质水平检测Btk、NFκB的表达。2.B细胞肿瘤细胞系实验：利用PCI-32765、Bortezomib处理Raji、Ramos细胞后,实验分成空白对照组、PCI-32765 (2μmol/l)单药组、Bortezomib (2μnmol/l)单药组、联合用药组(PCI-32765 2μmol/l+Bortezomib 20nmol/l),分别利用CCK-8法、流式细胞术检测细胞增殖与凋亡；Western blot法检测Btk、NFκB、c-IAP1、 BCL-XL、Caspase-3蛋白表达。结果1.AML实验结果：1.1在RNA及蛋白质水平,AML患者细胞中均有Btk、NFκB的表达。1.2 Btk、NFκB蛋白在初发期AML患者细胞中表达水平较高,达完全缓解后,表达下降或检测不到(p<0.05)。2.ALL实验结果：2.1在RNA及蛋白质水平,初发期ALL患者细胞中有Btk、NFκB的表达,表达水平不一。2.2 Btk、NFκB蛋白在35例初发ALL患者细胞中均有表达,其中27例Btk表达水平较高,23例NFκB表达水平较高,达完全缓解后,表达下降或检测不到(p<0.05),而同一患者复发后的白血病细胞中NFκB表达复又增高。2.3 Btk、NFκB的表达水平与ALL的治疗转归：2.3.1 Btk表达水平较高的27例患者有20例达完全缓解,完全缓解率为74.1%(20/27),其中8例患者1疗程达完全缓解,1疗程完全缓解率为29.6%(8/27),20例完全缓解后的患者中有12例早期复发(<6个月),早期复发率为60%(12/20)。2.3.2 Btk表达水平较低的8例患者有6例达完全缓解,完全缓解率为为75%(6/8), 其中5例患者1疗程达完全缓解,1疗程完全缓解率为62.5%(5/8),6例完全缓解后的患者有1例早期复发,早期复发率16.7%(1/6)。2.3.3 NFκB表达水平较高的23例患者有16例达完全缓解,完全缓解率为69.6%(16/23),其中6例患者1疗程达完全缓解,1疗程完全缓解率为26.1%(6/23),16例完全缓解后的患者中有9例早期复发(<6个月),早期复发率为56.3%(9/16)。2.3.4NFκB表达水平较低的12例患者有10例达完全缓解,完全缓解率为为83.3%(10/12),其中7例患者1疗程达完全缓解,1疗程完全缓解率为58.3%(7/12),10例完全缓解后的患者有4例早期复发,早期复发率40%(4/10)。2.3.5Btk、NFκB表达水平均较高的22例患者有14例达完全缓解,完全缓解率为63.6%(14/22),其中4例患者1疗程达完全缓解,1疗程完全缓解率为18.2%(4/22),14例完全缓解后的患者中有9例早期复发(<6个月),早期复发率为64.3%(9/14)。2.3.6Btk、NFκB表达水平均较低的6例患者有4例达完全缓解,完全缓解率为66.7%(4/6),其中3例患者1疗程达完全缓解,1疗程完全缓解率为50%(3/6),6例完全缓解后的患者中有1例早期复发(<6个月),早期复发率为25%(1/6)。3.细胞系实验结果：3.1PCI-32765、Bortezomib对Raji、Ramos细胞的增殖均有抑制作用,在一定浓度范围内呈剂量、时间依赖效应,两药联用后对细胞的抑制率明显高于PCI-32765和Bortezomib单药应用,两药具有协同作用,差异有统计学意义(P<0.05)。3.2PCI-32765 (2μmol/l)和Bortezomib (20nmol/l)分别单独和联合应用处理Raji、 Ramos细胞48h后,利用流式细胞术检测各组细胞凋亡及Western blot检测相关蛋白表达情况。3.2.1 Raji细胞实验结果,空白对照组、PCI-32765和Bortezomib单药组、联合用药组的细胞凋亡率分别为10.34±0.53%、24.26±0.91%、43.66±1.08%与74.06±0.72%,各组间有统计学差异(P<0.05)；与空白对照组及单药组相比,两药联用组Btk、NFκB、c-IAP1、BCL-XL蛋白的表达水平降低、Caspase-3表达水平增强。3.2.2 Ramos细胞实验结果,空白对照组、PCI-32765和Bortezomib单药组、联合用药组的细胞凋亡率分别为15.16±1.49%、71.36±0.82%、75.32±2.36%与84.30±0.91%,各组间有统计学差异(P<0.05)；两药联用组Btk、NFκB、c-IAP1、BCL-XL蛋白表达水平较空白对照组及单药组降低,Caspase-3表达水平较空白对照组及单药组增强。结论1、Btk、NFκB在急性白血病的发生、发展中发挥重要作用。2、PCI-32765、Bortezomib对Raji、Ramos细胞的增殖抑制、促进凋亡等有协同作用,其作用机制可能是通过抑制NFKB、c-IAP1、BCL-XL表达、增强Caspase-3表达。3、Btk、 NFκB可能作为急性白血病的潜在治疗靶点及用于预后预测,Btk抑制剂(PCI-32765)可能成为非常有潜力的B细胞肿瘤的靶向治疗药物。