新城疫(Newcastle disease, ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)引起的一种禽类急性、高度接触性、致死性传染病。该病发病急、致死率高,对养禽业的发展构成严重威胁,因此被世界动物卫生组织定为须通报的疫病(2005年之前为A类疫病),我国农业部将其列为一类疫病。NDV在分类地位上属于副粘病毒科(Paramyxoviridae)、禽腮腺炎病毒属(Avbulavirus)的成员之一,为单股不分节段的负链RNA病毒。整个基因组长度约为15kb,包含6个功能基因：3’-NP-P-M-F-HN-L-5,分别编码6个主要蛋白质(NP蛋白、P蛋白、M蛋白、F蛋白、HN蛋白和L蛋白)。野生鸟类一直被学术界认为是NDV的天然宿主,并在野鸟种群中能够持续循环存在,那么就有必要继续对野鸟种群中的NDV的流行情况、分布模式以及野鸟在NDV传播过程中的作用进行深入的调查研究与分析。因此,对野鸟NDV分子流行病学的监控分析,可以明确我国NDV毒株的流行、变异趋势,了解野鸟在NDV生态学中的作用,对于ND综合防制措施的有效调整有重要的实践意义。1.黑龙江部分地区野鸟源NDV分子流行病学调查。本实验对分离自三江自然保护区和哈尔滨周边地区的14株NDV各分离经过SPF鸡胚接种培养后,经过试验鉴定,这些分离株具有血凝性,且可被ND标准阳性血清所抑制和中和,不能被AI(H5亚型与H9亚型)标准阳性血清和EDS-76标准阳性血清所抑制。株进行了CEF细胞蚀斑纯化,然后进行全长F基因克隆、序列测定分析。结果表明,所有NDV分离株F基因ORF长度为1662nt,编码553个氨基酸,没有出现插入和缺失。将14株NDV分离株与GenBank中23株参考毒株F基因核苷酸序列绘制了系统发育进化树。14株分离株分别属于基因Ⅲ和Ⅷd,基因Ⅶd亚型(13/14),与我国普遍流行的基因Ⅶd亚型NDV毒株亲缘关系很近。基因Ⅲ型(1/14),与我国使用的疫苗株间核苷酸同源性在99%以上,可能来源于疫苗株或其变异株。2. Mallard/China/HLJ363/06株的毒力鉴定。对从黑龙江部分地区采集到的不表现典型ND症状的野鸟体内分离到的一株新城疫病毒(Mallard/China/HLJ363/06)进行了生物学特性研究。该病毒的最小致死量病毒致死鸡胚的平均时间(MDT)为50.4h；1日龄SPF鸡脑内接种分离病毒致病指数(ICPI)为1.83；6周龄SPF鸡静脉接种致病指数(IVPI)为2.24。由此,该病毒株确定属于新城疫病毒强毒型。3. Mallard/China/HLJ363/06株全基因组序列测定。参考GenBank中发表的相关全基因组参考序列,设计了10对特异性引物,采用RT-PCR方法对分离株Mallard/China/HLJ363/06全基因组进行扩增、克隆和序列测定,使用DNASTAR SeqMan进行全基因组序列拼接,通过绘制各基因的系统发育进化树来分析该毒株遗传变异情况,结果表明该分离株全基因组长度为15192nt,基因组长度符合“六碱基法则”。比Herts/33、Ireland/Ulster/67、LaSota等NDV毒株多6个碱基,多出的6个碱基的位置位于基因组的NP基因内,相对应于B1、LaSota、等NDV毒株基因组的1647nt-1648nt位。