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本文在已获克百威、三唑磷、绿黄隆抗体的基础上,制备了对克百威、三唑磷、绿黄隆具有特异性的高容量免疫亲和色谱(IAC)柱,建立了克百威、三唑磷IAC技术,在此基础上对多组分IAC技术进行研究,并对IAC条件进行优化。 选择0.02mol/LpH7.2磷酸盐缓冲液(PB)作为克百威IAC和三唑磷IAC柱的吸附与平衡介质,60%(体积分数)甲醇水溶液作为洗脱剂。在优化条件下,克百威、三唑磷IAC柱的动态柱容量分别达1.58μg/mL柱床体积、1.91μg/mL柱床体积。当标样溶液中克百威或三唑磷浓度<2ng/mL时,经IAC柱富集的效率分别高于167倍、213倍。稻米中添加克百威标样20ng/g或三唑磷标样0.1μg/g,提取液经相应IAC柱分离富集,洗脱液采用包被抗体直接竞争酶联免疫吸附分析(ELISA)法检测,重复5次,克百威的平均回收率85.87%,相对标准偏差(RSD)为4.71%。三唑磷的平均回收率97.93%,RSD为8.76%。同时用高效液相色谱(HPLC)法检测洗脱液中的三唑磷,平均回收率102.5%,RSD为4.44%。河水中添加克百威标样0.1μg/mL,经IAC柱分离富集,洗脱液采用ELISA法检测,重复5次,平均回收率89.75%,RSD为4.78%。洗脱液同时采用HPLC法检测,平均回收率93.13%,RSD为5.99%。ELISA法与HPLC法的检测结果基本一致。 将绿黄隆IAC柱、克百威IAC柱和三唑磷IAC柱串联,分别用于河水和土壤中克百威、三唑磷、绿黄隆的分离与富集,ELISA法分别检测洗脱液中的目标分析物。河水中添加克百威标样20ng/mL、三唑磷标样20ng/mL、绿黄隆标样20ng/mL,5次重复试验的结果:克百威的平均回收率102.4%,RSD为8.27%;三唑磷的平均回收率95.01%,RSD为7.47%;绿黄隆的平均回收率95.71%,RSD为9.74%。河水中添加克百威标样100ng/mL、三唑磷标样100ng/mL、绿黄隆标样100ng/mL,5次重复试验的结果:克百威的平均回收率92.50%,RSD为9.02%;三唑磷的平均回收率94.78%,RSD为8.96%;绿黄隆的平均回收率94.39%,RSD为10.18%。土壤中添加添加克百威标样20ng/g、三唑磷标样20ng/g、绿黄隆标样20ng/g,5次重复试验的结果:克百威的平均回收率94.63%,RSD为8.13%;三唑磷的平均回收率98.49%,RSD为11.26%:绿黄隆的平均回收率98.78%,RSD为7.84%。土壤中添加克百威标样100ng/g、三唑磷标样100ng/g、绿黄隆标样100ng/g,5次重复试验的结果:克百威的平均回收率97.71%,RSD为4.65%:三唑磷的平均回收率89.67%,RSD为6.50%;绿黄隆的平均回收率92.93%,RSD为8.46%。符合残留分析的要求。