洋金花杀灭鱼类指环虫的活性成分研究

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鱼类体外寄生指环虫病是危害水产养殖最为严重的寄生虫病害之一。当前,国内外防治主要以化学药物为主,长期使用导致指环虫的抗药性与日俱增,用药量增大,治疗效果下降,成本提高,甚至还产生致畸、致突变等副作用。因此,开发能替代现有药品的无公害、环保型天然植物源杀虫药,以及从天然植物中分离杀虫活性成分,进而进行仿生合成是今后研究的方向和热点。本研究正是以此为出发点开展了活性植物筛选、成分预试、杀虫活性成分的跟踪分离、光谱分析等工作,并取得了以下结果:1.具有杀虫活性植物的筛选:通过药效试验,检测了15种天然植物乙醇提取物对寄生于金鱼的中型指环虫的杀灭活性。试验结果表明:48h内,洋金花、蛇床、鸦胆子、槟榔、云南重楼、木通、牛心朴子、吴茱萸和夹竹桃的最高杀虫率均达70%以上,其中洋金花、蛇床和鸦胆子的最高杀灭率达到100%,并且这几种植物对试验鱼安全性较高;另外,牵牛子、青蒿对指环虫有一定杀灭作用,不仅杀虫浓度高,杀虫率也较低,分别为55%、30%。综合15种植物的杀虫试验效果、药物毒性以及实验操作的实际情况,再结合陕西当地资源情况,选择洋金花作为研究对象。2.洋金花化学成分预试与杀虫活性部位筛选:采用试管法对洋金花化学成分进行预试。结果显示:洋金花以生物碱成分为主,提取物呈弱碱性;用石油醚、氯仿、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、蒸馏水六种溶剂对洋金花进行部位提取,采用药效试验观察各部位提取物的杀虫活性,结果表明:洋金花的杀虫活性部位为氯仿提取物浓度为200 mg.L-1(按生药计)。乙醇提取物和乙酸乙酯提取物也有一定的杀虫作用,杀虫最佳浓度分别为400 mg.L-1、250 mg.L-1(按生药计)时,最高杀灭率达85%以上,且金鱼的中毒率较低;石油醚提取物、丙酮提取物和蒸馏水提取物在试验浓度范围内几乎不具备杀虫作用。所以洋金花的氯仿提取物杀虫活性是洋金花主要杀虫活性部位。3.洋金花杀虫活性成分的追踪分离与结构鉴定:采用三级硅胶柱层析法,一级柱以氯仿:甲醇为溶剂系统梯度洗脱,对洋金花的氯仿提取物进行分离,得到A—F等6段混合物,药效试验发现,C段混合物具有较强的杀虫活性,48h内平均杀灭率为95%。二级柱合并C段化合物以石油醚:乙酸乙酯为溶剂系统进行柱层析分离纯化,得到C1—C7段混合物,药效试验发现,C6段混合物具有突出的杀虫活性,48h内的平均杀灭率大于95%。三级柱合并C5、C6和C7段化合物,以石油醚:乙酸乙酯的比例为1.5:1恒定极性洗脱系统对C6段进行分离,得到三种化合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ,药效试验发现,化合物Ⅱ48h内的平均杀灭率为100%,杀虫效果明显优于化合物Ⅰ和Ⅲ。对化合物Ⅱ进行紫外光谱,气质联用色谱分析,结合杨炳友论文EI-MS图谱。推测该化合物可能为醉茄内酯类化合物中的一种物质。
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