论文部分内容阅读
目的MicroRNA(miRNA)是长约20bp的单链小RNA,对基因表达起重要的调控作用,同样,miRNA在急性白血病(AL)的发病、诊断分型及预后等方面也有着重要意义。我们对5种AL相关miRNA进行研究,探讨其在AL诊断分型及预后中的价值。方法急性髓细胞白血病(AML)147例(M0 1例,M1 12例,M2 48例,M3 14例,M4 13例,M5 15例,M6 3例,M7 1例),急性淋巴细胞白血病(ALL) 40例(B-ALL 29,T-ALL 11例)和慢性粒细胞白血病(CML)急变10例(AML变6例,ALL变4例)。提取其骨髓或外周血标本总RNA,并进行引物特异性逆转录,运用RocheLightCycler定量PCR仪对5个miRNA(miR-128、Let-7b、miR-223、miR-181a和miR-155)进行定量检测,循环阈值(Ct值)比较法进行miRNA表达相对定量分析。通过常规R显带技术进行染色体核型分析,并运用普通PCR方法对AML患者进行人Fms样酪氨酸激酶3内部串联重复(FLT3-ITD)突变检测,凝胶电泳出现额外>366 bp的DNA条带定义为FLT3-ITD突变阳性。结果发现miRNA-128在ALL显著高表达(p<0.001),平均秩和为118.20,大于AML的63.73。而Let-7b和miR-223在ALL明显低表达(p<0.001),平均秩和分别为48.94 vs 90.70和40.95 vs 93.81。和正常对照相比发现,miR-128在ALL明显高表达(p<0.001),但在AML和正常对照组表达无明显差异(p=0.9);Let-7b和miR-223在AML和ALL患者表达均高于正常对照组(p<0.001)。对107例AML患者进行miR-181a定量检测发现,miR181a在M1、M2患者组(n=60)表达较M4、M5患者组(n=28)明显增高(p=0.013),其平均秩和为49.12和34.61。将有染色体结果的84例AML患者依据染色体核型分为良好(n=19)、中等(n=50)、高危(n=15)三组后统计发现,miR-181a在预后良好组表达明显高于高危患者组(p=0.01),平均秩和分别为56.21和33.87;对107例AML患者进行FLT3-ITD突变检测,突变阳性患者共计10例(9.4%),在正常核型患者中FLT3-ITD突变阳性率为21.9%。通过分析FLT3-ITD突变和miR-155表达关系后可知,在FLT3-ITD突变阳性组miR-155表达显著高于阴性组(p=0.002),平均秩和为83.2和50.99。和正常对照比较发现miR-155在FLT3-ITD突变阳性组明显高表达(p=0.002),阴性组和正常对照组表达无明显差异。结论MiR-128、Let-7b、miR-223和miR181a在ALL、AML及其亚型和正常人群表达不同,对AL诊断分型有一定参考价值。MiR-181a和miR-155对疾病预后判断有一定指导意义。