猪霍乱沙门菌(Salmonella enterica subsp.enterica serovar Choleraesuis)是引起2～4月龄仔猪副伤寒的主要病原。仔猪副伤寒可一年四季发生,多与猪瘟混合感染,具有较高发病率与死亡率,可造成重大损失。猪霍乱沙门菌同样对人类具有较高的致病性,常导致人发烧及败血病等全身性感染症状。此外,当前流行的猪霍乱沙门菌的多重耐药性严重,对人类健康的潜在威胁很大,因此猪霍乱沙门菌的防控备受关注。本研究利用抑制差减杂交技术(SSH)构建了猪霍乱沙门菌强毒株与弱毒株的差减文库,对差异序列进行了初步分析。利用蛋白质二维电泳技术(2-DE)以及实时荧光定量PCR分析了两菌株间相关蛋白的表达差异。1猪霍乱沙门菌强毒株与弱毒株抑制差减文库的构建及差异基因筛选利用抑制性差减杂交技术对猪霍乱沙门菌强毒株C78-2与弱毒株C500进行基因组片段的差异分析,成功构建了差减文库。经Dot-blot筛选后,对片段进行测序和同源性分析,结果在C78-2中发现了5个特异基因序列,分别为asr、ydgF、 rpoS、 ptsG和一个未知功能序列。同时,在C500株基因组中还发现大小为3290bp的DNA缺失区域,其内包含asr、 ydgD、 ydgE、 ydgF等4个基因。该差减文库的建立为研究猪霍乱沙门菌弱毒株C500致弱机理提供了重要材料。2猪霍乱沙门菌强毒株与弱毒株比较蛋白质组学初步研究利用蛋白质二维电泳技术对猪霍乱沙门菌强毒株C78-2和弱毒株C500的菌体蛋白进行了比较研究。将得到的电泳图谱用PDQuest软件分析后,选择C78-2中特异的5个蛋白点进行了质谱分析,共有4个蛋白鉴定成功,成功率为80%。这些蛋白分别是CheY蛋白磷酸化酶CheZ、菌铁蛋白、OsmY蛋白以及核糖-5-磷酸异构酶RpiA。 CheZ蛋白是CheY蛋白的磷酸化酶,是细菌趋化性的调节因子。细菌铁蛋白是一种铁储存血红素蛋白,与储存机体中过剩的铁,避免铁离子造成的细胞毒性有关。OsmY蛋白是细菌的一种周质蛋白,与细菌抵抗高渗透压环境有关。核糖-5-磷酸异构酶(RpiA)是一种磷酸戊糖途径和卡尔文循环中必需的酶。这些研究结果为了解猪霍乱沙门菌遗传进化、致弱机理等提供了一定的理论基础。3实时荧光定量PCR检测猪霍乱沙门菌相关蛋白体外表达差异根据猪霍乱沙门菌强毒株C78-2和弱毒株C500基因组和蛋白质组学比较结果,共设计8个基因的检测引物,包括rpoS、spvA、 spvB、 spvC、 bfr、cheZ、 osmY、 rpiA,同时设计了猪霍乱沙门菌gmk的引物作为内参。提取两株猪霍乱沙门菌体外液体LB培养的总RNA,反转录成cDNAs,利用荧光定量PCR比较各基因在体外培养时raRNA的表达水平差异。结果表明：rpoS在C500中不表达,从而进一步证明了C500中rpoS的缺失。研究还发现,rpoS调控的spvA、spvB、spvC、osmY以及bfr。cheZ、rpiA在C78-2中的表达量显著高于C500,与预期结果相符。