目的:目前,口腔癌的治疗仍是以手术为主,并辅以局部放疗和全身化疗的综合治疗,但手术造成的功能障碍和外貌畸形对患者来说是不愿承受的,而放化疗对患者机体也存在着严重的毒副作用。因此研究针对口腔癌患者的免疫治疗具有重要的临床应用价值。目前临床上已应用IL-2、CSF、IFN、TNF-α等治疗肿瘤。IL-21是IL-2家族中的新成员,在结构上和功能上与IL-2类似,具有持久增强效应T细胞及活化NK细胞的功能,并且以没有剂量依赖性的毒副作用而优于IL-2。因此,IL-21日益受到人们的关注,其最具潜力的应用前景在于肿瘤的生物治疗领域。本试验采用IL-21、IL-2单独或联合刺激口腔癌患者外周全血细胞,观察T淋巴细胞内IL-2+、IFN-γ+、CD4+/IL-2+、CD4+/IFN-γ+分泌水平的变化及其时间依赖性,探讨IL-21、IL-2单独或联合应用对口腔癌患者机体抗肿瘤免疫功能的影响,为IL-21应用于口腔癌的免疫治疗提供试验性理论依据。方法:抽取晨起空腹静脉肝素抗凝血3ml,与含10%灭活新生小牛血清,100U/ml青霉素和100ug/ml链霉素的RPMI 1640培养基按1:1比例加入24微孔培养板,设空白对照组和试验组,对照组不加入任何细胞因子,试验组依照加入细胞因子的不同分为A、B、C组。A:IL-2组,B:IL-21组、C:IL-2+IL-21组。(细胞因子用量:IL-2 1000U/ml,IL-21 15ng/ml),各组在37℃、5%CO2、饱和湿度条件下培养,选取24h、48h两个作用时间点,以流式细胞仪分别测定各组全血培养细胞中T淋巴细胞内IL-2+、IFN-γ+ T淋巴细胞所占的比例及CD4+/IL-2+、CD4+/IFN-γ+ T淋巴细胞所占的比例,以观察其分泌水平的变化及其时间依赖性。结果:1培养后各组T淋巴细胞内细胞因子分析结果1.1 IL-2+的表达:24小时空白对照组T淋巴细胞内IL-2+ T淋巴细胞所占的比例为1.2313+0.1703%,而A、B、C三组分别为3.0590+0.3897%、3.2043+0.5345%、3.1740+0.4612%,48小时对照组为1.2486+0.0964%,试验组分别为6.2083+1.2570%、4.7463+0.6297%、5.3133+1.0607%,在两个检测时间点,各试验组比对照组IL-2+ T淋巴细胞比例均有显著提高,(P﹤0.05),而A、B、C三组间均无明显差异(P>0.05)。1.2 IFN-γ+的表达:24小时空白对照组T淋巴细胞内IFN-γ+ T淋巴细胞所占的比例为1.0033+0.0919%,而A、B、C三组分别为2.6447+0.3484%、2.5103+0.2728%、2.5390+0.2691%,48小时对照组为1.0128+0.1025%,试验组分别为5.9977+0.9969%、5.6327+1.121%、5.5280+0.8846%,在两个检测时间点,各试验组比对照组IFN-γ+ T淋巴细胞比例均有显著提高(P﹤0.05),而A、B、C三组间均无明显差异(P>0.05)。1.3 CD4+/IL-2+的表达:24小时空白对照组T淋巴细胞内CD4+/IL-2+T淋巴细胞所占的比例为0.6670+0.1096%,而A、B、C三组分别为2.2660+0.3767%、2.3727+0.3341%、2.4577+0.3828%,48小时对照组为0.6738+0.0917%,试验组分别为5.5490+1.0036%、4.7463+0.6297%、5.2780+0.8209%,在两个检测时间点,各试验组比对照组CD4+/IL-2+T淋巴细胞比例均有显著提高(P﹤0.05),而A、B、C三组间均无明显差异(P>0.05)。1.4 CD4+/IFN-γ+的表达:24小时空白对照组T淋巴细胞内CD4+/IFN-γ+ T淋巴细胞所占的比例为0.5033+0.0846%,而A、B、C三组分别为1.4853+0.2079%、1.4027+0.1747%、1.6113+0.2101%,48小时对照组为0.5128+0.0735%,试验组分别为4.7390+0.5536%、5.0293+0.7189%、5.2777+0.8083%,在两个检测时间点,各试验组比对照组CD4+/IFN-γ+ T淋巴细胞比例均有显著提高(P﹤0.05),而A、B、C三组间均无明显差异(P>0.05)。2各试验组培养前、培养24小时与培养48小时检测结果比较2.1 IL-2+的变化:各组培养后较培养前IL-2+的表达均有显著增强(P﹤0.05),而培养后两个时间点比较,A组中培养48小时较24小时IL-2+的表达增强,有统计学意义(P﹤0.05)。B组和C组中培养48小时较24小时IL-2+的表达虽有增强,但无统计学意义(P>0.05)。2.2 IFN-γ+的变化:各组培养后较培养前IFN-γ+的表达均有显著增强(P﹤0.05),而培养后两个时间点比较,A、B、C三组中培养48小时较24小时IFN-γ+的表达均有显著增强,有统计学意义(P﹤0.05)。2.3 CD4+/IL-2+的变化:各组培养后较培养前CD4+/IL-2+T的表达均有显著增强(P﹤0.05),而培养后两个时间点比较,A、B、C三组中培养48小时较24小时CD4+/IL-2+的表达均显著增强,有统计学意义(P﹤0.05)。2.4 CD4+/IFN-γ+的变化:各组培养后较培养前CD4+/IFN-γ+的表达均有显著增强(P﹤0.05),而培养后两个时间点比较,A、B、C三组中培养48小时较24小时CD4+/IFN-γ+的表达均显著增强,有统计学意义(P﹤0.05)。3 IL-21、IL-2单独或联合刺激后T淋巴细胞内细胞因子表达的增强效果与淋巴结转移及临床分期的关系3.1 IL-2刺激组3.1.1与淋巴结转移的关系:无淋巴结转移组培养48小时后IL-2+、IFN-γ+、CD4+/IL-2+、CD4+/IFN-γ+的增强效果均高于有淋巴结转移组。其中CD4+/IFN-γ+的增强效果有统计学意义(P<0.05),IL-2+、IFN-γ+、CD4+/IL-2+的增强效果无统计学意义(P>0.05)。3.1.2与临床分期的关系:临床Ⅰ、Ⅱ期组培养48小时后IL-2+、IFN-γ+、CD4+/IL-2+、CD4+/IFN-γ+的增强效果均高于临床Ⅲ、Ⅳ期组。其中IL-2+、IFN-γ+、CD4+/IFN-γ+的增强效果有统计学意义(P<0.05),CD4+/IL-2+的增强效果无统计学意义(P>0.05)。3.2 IL-21刺激组3.2.1与淋巴结转移的关系:无淋巴结转移组培养48小时后IL-2+、IFN-γ+、CD4+/IL-2+、CD4+/IFN-γ+的增强效果均高于有淋巴结转移组。其中IL-2+、IFN-γ+的增强效果有统计学意义(P<0.05),CD4+/IL-2+、CD4+/IFN-γ+的增强效果无统计学意义(P>0.05)。3.2.2与临床分期的关系:临床Ⅰ、Ⅱ期组培养48小时后IL-2+、IFN-γ+、CD4+/IL-2+、CD4+/IFN-γ+的增强效果均高于临床Ⅲ、Ⅳ期组。其中IL-2+、IFN-γ+、CD4+/IFN-γ+的增强效果有统计学意义(P<0.05),CD4+/IL-2+的增强效果无统计学意义(P>0.05)。3.3 IL-21联合IL-2刺激组3.3.1与淋巴结转移的关系:无淋巴结转移组培养48小时后IL-2+、IFN-γ+、CD4+/IL-2+、CD4+/IFN-γ+的增强效果均高于有淋巴结转移组。其中CD4+/IFN-γ+的增强效果有统计学意义(P<0.05),IL-2+、IFN-γ+、CD4+/IL-2+的增强效果无统计学意义(P>0.05)。3.3.2与临床分期的关系:临床Ⅰ、Ⅱ期组培养48小时后IL-2+、IFN-γ+、CD4+/IL-2+、CD4+/IFN-γ+的增强效果均高于临床Ⅲ、Ⅳ期组。其中IL-2+、IFN-γ+的增强效果有统计学意义(P<0.05),CD4+/IFN-γ+、CD4+/IL-2+的增强效果无统计学意义(P>0.05)。结论:1单独应用IL-21、IL-2或二者联合应用,均能增强口腔癌患者T淋巴细胞内IL-2+、IFN-γ+、CD4+/IL-2+和CD4+/IFN-γ+的表达,提示应用IL-21、IL-2可能增强机体的抗肿瘤免疫功能。2 IL-21与IL-2在影响口腔癌患者T淋巴细胞内细胞因子分泌水平方面并无明显差异,提示IL-21有作为IL-2替代品的潜力。3在增强机体的抗肿瘤免疫功能方面,IL-21与IL-2之间无明显协同作用。4 IL-21、IL-2刺激下口腔癌患者T淋巴细胞内IL-2+、IFN-γ+、CD4+/IL-2+和CD4+/IFN-γ+的表达存在时间依赖性,提示IL-21、IL-2对机体抗肿瘤免疫功能的影响随时间的延长而有所增强。5 IL-21、IL-2单独或联合刺激后机体抗肿瘤免疫功能的增强效果与淋巴结转移及临床分期有相关性,提示早期口腔癌患者抗肿瘤免疫功能可能较晚期患者更易被增强。