黑枸杞成分分析及其提取物抗氧化和抑制α-葡萄糖苷酶活性研究

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目的黑枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)含有丰富的营养成分和酚酸、黄酮、生物碱、花青素等活性物质,具有较高的食用价值和药用价值,近年来受到广泛关注。本文研究黑枸杞的矿物元素、氨基酸及多酚的组成,重点研究黑枸杞提取物的抗氧化能力及对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用。方法1.黑枸杞中矿物元素、氨基酸及植物化学物分析用微波消解-原子吸收分光光度法分析样品中微量元素铜、锌、铁、锰、钴、镍、铬、铅及常量元素钙、镁、钾、钠的含量;磷钼蓝比色法测定样品中磷含量;用氨基酸分析仪测定样品中氨基酸组成及含量;以纯水和60%(V/V)乙醇为溶剂,超声辅助下制备黑枸杞的提取物,分别标记为水提物(WEM)和醇提物(EEM);用分光光度法测定总多酚及总黄酮含量,用高效液相色谱法测定酚酸、黄酮、生物碱及花青素的含量。2.黑枸杞提取物的抗氧化活性分析将分光光度法用于研究黑枸杞提取物对羟基自由基(·OH)、DPPH自由基(DPPH·)、ABTS自由基(ABTS+·)的清除能力,及对Fe3+的还原能力;并与水溶性维生素E(Trolox)的抗氧化活性进行比较。3.黑枸杞提取物对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用以4-硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷为底物,用分光光度法测定酶促反应产物对-硝基苯酚的含量,据此考察黑枸杞提取物对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用。并与阿卡波糖的酶抑制效果进行比较。结果1.黑枸杞中矿物元素、氨基酸及多酚的组成及含量黑枸杞中含量最高的微量元素是铁147.26±2.44 μg/g,含量最低的是钴0.11±0.04μg/g,锌、铜、锰、镍、铬的含量分别为 26.93± 1.48、13.84±1.58、8.57±0.22、2.65±0.67、1.95±0.28μg/g;有毒元素铅的含量为 0.13±0.01 μg/g,符合食品卫生标准。常量元素的含量由高到低的顺序为:钾、钙、钠、磷、镁,分别为:21.77±1.04,3.52±0.54,3.41±0.27,2.59±0.22,1.61±0.04mg/g。黑枸杞中检测了 16种氨基酸,含有7种营养必需的氨基酸(EAA),种类较齐全,分别为苏氨酸(Thr)、缬氨酸(Val)、蛋氨酸(Met)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、苯丙氨酸(Phe)、赖氨酸(Lys),含量分别为0.31、0.33、0.09、0.24、0.37、0.42、0.36 g/100 g;谷氨酸(Glu)的含量最高 1.12 g/100 g,蛋氨酸(Met)的含量最低0.09 g/100 g。氨基酸的总量(TAA)为6.93 g/100 g,EAA/TAA为29.29%;Glu和天冬氨酸(Asp)为鲜味氨基酸,含量为31.31%;药效氨基酸Asp、Glu、Gly、Met、Leu、Tyr、Phe、Lys、Arg之和占氨基酸总量的 66.09%。WEM中总多酚、总黄酮的含量分别为22.07±0.39、15.70±0.36 mg/g,EEM中总多酚、总黄酮的含量分别为23.51±0.41、20.62±1.20 mg/g。WEM中对-香豆酸、芦丁和秋水仙碱的含量分别为400.69±50.16、354.64±35.43、69.95±7.39 mg/kg。EEM中对-香豆酸、芦丁和秋水仙碱的含量分别为229.30±26.45、241.01±37.23、104.10±20.94 mg/kg。WEM中飞燕草素与矮牵牛素的含量分别为45.51±8.86、31.99±8.07 mg/kg,EEM中飞燕草素与矮牵牛素的含量分别为106.98±26.88、66.90±2.59 mg/kg。2.黑枸杞提取物的抗氧化能力黑枸杞提取物具有一定的抗氧化能力,随着提取物浓度的增加,抗氧化能力增强。WEM清除·OH、DPPH·、ABTS+·的半数抑制浓度(IC50)分别为354.66±4.65、77.31±1.49、99.48±5.21 μg/mL;EEM 清除·OH、DPPH·、ABTS、.的 IC50 分别为 888.40±44.53、67.79±6.01、75.84± 1.56 μg/mL;WEM 和 EEM 对Fe3+具有一定还原能力,且还原能力相近。与Trolox的抗氧化能力相比,黑枸杞提取物的抗氧化能力较弱。3.黑枸杞提取物对α-葡萄糖苷酶活性的抑制效果黑枸杞提取物对α-葡萄糖苷酶活性具有明显的抑制作用,随着提取物浓度的增加,对酶活性的抑制作用增强。WEM、EEM及阿卡波糖的IC50分别为1272.27±42.40、1176.24±17.75 μg/mL、0.14±0.00 ng/mL。WEM 和 EEM 对α-葡萄糖苷酶的抑制作用均为可逆性抑制,抑制类型为混合抑制,抑制常数Kj分别为 1.42、1.01 mg/mL,Kis分别为 3.64、1.74 mg/mL。结论1.黑枸杞中含有矿物元素、营养必需的氨基酸及植物活性成分,如对-香豆酸、芦丁、秋水仙碱、飞燕草素、矮牵牛素等。2.黑枸祀提取物具有较强的自由基清除能力,对α-葡萄糖苷酶活性具有明显的抑制作用。3.黑枸杞提取物中的酚酸、黄酮、生物碱及花青素可能是其具有抗氧化、酶活性抑制作用的物质基础。
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