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目的:建立体外脐带血单核细胞来源与健康成人外周血单核细胞来源的细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)诱导培养体系,比较脐带血和成人末梢血诱导分化的免疫活性细胞具有与肿瘤杀伤活性相关的细胞表型的表达水平,并比较选择性阻断程序性死亡受体1(programmed death1,PD-1)前后,两种不同来源CIK细胞对肺癌H1299细胞的杀伤能力。 方法:无菌条件下采用密度梯度离心法分别从脐带血与健康成人外周血中分离获得单个核细胞,用γ-干扰素(IFN-γ)、重组人IL-2、重组人IL-1a、CD3单克隆抗体(OKT3)等细胞因子诱导扩增CIK;于体外培养第14天采用流式细胞仪检测两种来源CIK的细胞表型;MTT法检测两种不同来源的CIK细胞阻断PD-1/PD-Ls信号通路前后对肺癌细胞株H1299的杀伤活性。 结果:(1)脐带血来源与健康成人外周血来源的单个核细胞经14天诱导后,流式细胞仪分析CIK表型,表达CD3+、CD3+CD8+和CD3+CD56+表型细胞所占百分比均显著提高;脐带血单核细胞来源的CIK细胞表型CD3+(88.18±7.80%)、CD3+CD8+(54.35±2.65%)和CD3+CD56+(53.01±2.71%);健康成人外周血单核细胞的CIK免疫细胞表面标志CD3+(54.01±6.31%)、CD3+CD8+(35.03±6.75%)和CD3+CD56+(28.77±4.48%),两者各组间均存在显著差异(P<0.05),说明脐带血单核细胞来源的CIK含有的免疫杀伤效应细胞和细胞毒细胞比例更高。 (2)MTT法检测两种不同来源的CIK细胞阻断PD-1/PD-Ls信号通路前后对肿瘤细胞株杀伤活性结果显示:同种来源的CIK细胞阻断PD-1/PD-Ls信号通路前后均表现为,效应细胞量越大,杀瘤效果越好(P<0.05);在同一效-靶比下,阻断PD-1/PD-Ls信号通路前后脐带血单核细胞来源的CIK杀瘤能力均强于外周血来源的CIK细胞组(P<0.05)。另外,相同效-靶比下,同种来源CIK细胞加入PD-1抗体选择性阻断该通路后,较未加入PD-1抗体组杀伤活性增强(P<0.05)。 结论:体外培养的脐带血来源的CIK细胞较健康成人外周血来源的CIK细胞CD3+、CD3+CD8+和CD3+CD56+细胞比例高(P<0.05),对肿瘤细胞的杀伤活性更强(P<0.05)。两种来源的CIK在阻断PD-1/PD-Ls信号通路前后其杀伤活性均呈数量依赖性,效-靶比越高,杀伤力越强(P<0.05)。在同一效-靶比下,阻断PD-1/PD-Ls信号通路前后脐带血单核细胞来源CIK的杀伤作用均显著高于健康成人外周血单核细胞来源的CIK(P<0.05)。相同效-靶比下,同种来源CIK细胞加入PD-1抗体选择性阻断该通路后,杀伤活性均增强(P<0.05)。