目的:胎盘是妊娠母体与胎儿之间进行交流的临时性器官。胎盘发育或功能障碍会导致严重的妊娠相关疾病,给奶牛业带来很大的经济损失。由于胎盘类型不同于人类和啮齿类,且缺乏功能性奶牛胎盘类器官模型,因此奶牛胎盘形成、发育和功能调节机制,及其与妊娠并发症的分子关联还远未阐明,对相关妊娠疾病的预测和干预缺乏科学有效的技术策略。本试验旨在通过构建体外培养的奶牛胎盘滋养层类器官,以期能够为奶牛胎盘发育相关妊娠疾病的体外研究提供良好的类器官模型。方法:本研究首先利用HE染色技术对牛妊娠早期胎盘滋养层进行组织结构特征观察;采用免疫组织化学染色对比2、3、4月妊娠胎盘滋养层细胞中Ki67的表达定位和水平;利用组织块贴壁法将筛选出的妊娠3月胎盘组织块于TOM培养基中进行原代滋养层细胞培养与鉴定。随后,与原代细胞转染端粒酶建立的永生化牛滋养层细胞系BTCs分别放入基质胶中进行类器官的培养;采用免疫荧光技术检测所培养类器官合胞体标记物CD46、CD71和胎盘催乳素（CSH1）分泌情况;RNA测序分析筛选类器官形成调节基因;将体外构建的滋养层类器官与子宫内膜上皮细胞（EECs）共培养,Western blot检测EECs内子宫容受性相关因子在共培养前后的表达变化。结果:（1）HE染色结果表明牛妊娠早期胎盘滋养层含有单核细胞与双核细胞,且两种细胞交互生长,无分层界限。（2）免疫组化结果显示,妊娠3月胎盘滋养层增殖细胞比例相比其他早期胎盘最高,因而采取3月胎盘进行后续试验。（3）使用TOM培养基培养的原代滋养层细胞呈细胞集落生长,类似滋养层祖细胞。（4）免疫荧光染色结果表明,所培养滋养层类器官具有分泌CSH1功能,且表达合胞体标记因子。（5）RNA测序分析发现类器官形成调节基因簇与妊娠3月龄胎盘发育调节相关。（6）Western blot结果显示,与类器官共培养后EECs容受性调节因子整合素αVβ3、Wnt7a、HOXA10、IFNAR-1和IFNAR-2的蛋白表达量均显著增高（p＜0.05）。结论:（1）妊娠3月牛胎盘内增殖细胞比例高,适宜进行原代滋养层的培养和体外滋养层类器官的构建。（2）原代胎盘滋养层细胞和BTCs在TOM培养基结合基质胶体系下均成功培养获得了牛胎盘滋养层类器官,且具有分泌双核细胞分泌蛋白和调节子宫容受性功能,为未来深入进行牛的胎盘发育和生命孕育机制研究提供了有力的类器官体外模型。