本文研究工作分为两部分： 　　第一部分：尼克酰胺转甲基酶(NNMT)在人肾癌组织中表达情况的研究。 本课题针对NNMTmRNA的结构和表达量作了研究，设计了可以扩增NNMTcDNA全长的引物，构建了含NNMTcDNA全长片段的T-A克隆，证明了肾癌组织中存在着完整的NNMT1mRNA表达，并利用westernblot和免疫组化进一步分析了NNMT蛋白在肾癌组织中的表达情况。 研究方法与结果： 采用RT-PCR和TA克隆方法检测了NNMT基因在肾脏组织中的表达。为了避免DNA污染对实验结果的影响，用于PCR扩增的NNMT的上下游引物分别设计在第一和第三个外显子上，之间相隔两个内含子序列。结果显示肾脏组织中有NNMT基因的完整mRNA的表达，其核苷酸序列与肝组织NNMT(GenbankNM_006169)100％同源。 采用westernblot方法检测人肾癌组织和癌旁组织中NNMT蛋白表达水平的差异。以actin作为内参照，结果显示肾癌组织中NNMT蛋白含量高于癌旁组织。 采用常规的免疫组化方法对肾癌组织进行染色。检测人肾癌组织和癌旁组织中NNMT的蛋白表达情况，研究它在肿瘤细胞中表达水平及亚细胞定位，并且比较其与正常细胞中的差异。因为要避免肾脏组织内源性生物素较丰富引起的非特异性染色，二抗采用辣根过氧化物酶标记。结果显示NNMT蛋白在肾癌组织中有着极高的表达，它在细胞中的高表达分布呈弥漫性，在胞浆和胞核均有表达；在癌旁的对照肾组织中只有肾小管上皮细胞有较低水平的表达，在肾小球没有表达。 研究结论： 1、肾癌组织中存在NNMT基因的表达，即存在完整的NNMTmRNA分子。且RT-PCR半定量结果发现肿瘤组织NNMTmRNA表达水平高于癌旁组织。 2、肾癌组织中NNMT蛋白含量高于癌旁组织。 3、NNMT蛋白在肾癌组织中有着极高的表达，且胞浆和胞核均有阳性染色，在癌旁的对照肾组织中只有肾小管上皮细胞有较低水平的表达，在肾小球没有表达。 第二部分 针对PLK1的SiRNA对结肠癌细胞SW480作用的研究 PLK1(Polo-like kinase)是一种高度保守的丝氨酸/苏氨酸激酶，对细胞周期的正常进行、中心体成熟、胞质分裂以及肿瘤的发生等方面均有重要影响，在大多数人类肿瘤中均表现为高表达。被认为可以作为癌症的血清标志物。为了研究PLK1在肿瘤细胞生长和分裂中的作用，本文利用SiRNA技术在肿瘤细胞SW480中敲除了PLK1的mRNA表达并观察了mRNA敲除后细胞生物学特征的改变。 研究结论： 1、化学合成的特异siRNA knock-down SW480细胞中的PLK1基因表达，并随之影响PLK1的蛋白水平。 2、通过SiRNA敲除PLK1 mRNA，可以有效抑制细胞存活，诱导SW480细胞凋亡。