目的:用霍乱毒素亚单位B结合荧光素488和594 (Cholera toxin subunit B conjugated with Alexa Fluor 488, 594, CTB-Alexa488, 594)示踪技术揭示大鼠穴位及穴位与脏腑相关神经属性的特异性联系,从形态学角度揭示单穴位、穴位与穴位、穴位与脏腑三个层次的结构特点及联系。方法:将成年(SD)大鼠(雄性)18只,体重200-280g,饲养于12h光照/12h黑暗的环境中,自由饮水和摄食。微量注射,荧光示踪剂(CTB-Alexa488或CTB-Alexa594),分3种类型操作实验(一)单穴位注射(二)双穴位注射(三)单穴位与相关脏腑注射。待72小时后灌流固定取材(背根结、脊髓、脑)、观察。结果:实验证实穴位在脊髓等神经系统的节段行、区域性分布特点,穴位的神经属性特点明确。单标法所示在腰神经节内的46个神经元中主要集中在L5/L4,腰髓前角内发现的神经元主要集中在L5;双标法所示在脊神经节内的330个神经元中双标的主要集中在C7/C6,颈髓前角内发现的神经元中双标的神经元主要集中在C8;穴位与内脏标记法所示在背根节内仅有单一标记的神经元,尚未发现被双标记的神经元,脊髓内也仅有单一标记的神经元,尚未发现。同时证实该荧光示踪技术拥有简单易行、周期短,实验操作步骤简短等特点。结论:体表穴位的神经节段性与区域性特性以及穴位治疗作用与神经系统存在联系;而双穴标记证实双穴位不仅存在节段性和区域性特点而且证实穴位与穴位之间存在神经解剖学上的联系或许同一神经元支配着两个不同的区域,此结果为原络配穴临床联合治疗提供解剖学依据。