人酸性成纤维细胞生长因子(FGF1)在多种生物进程中都发挥重要作用,如胚胎发育、细胞生长和分化、形态发生、组织修复等,FGF1以其广泛的生物功能被认为是一种重要的用于治疗多种疾病的蛋白药物。本研究的目的是构建一个FGF1乳腺特异表达载体,用来以后制作FGF1乳腺反应器,从而在转基因牛奶中大量生产FGF1蛋白来满足临床需要。本实验中,我们构建了FGF1乳腺特异表达载体,并且在人的乳腺癌细胞系(MCF-7)中验证了该载体的功能。该载体转染MCF-7细胞后,通过EGFP和puro双重筛选得到细胞克隆,并对细胞克隆进行RT-PCR和western blot分析和细胞增殖测试。表明该载体能够成功的表达人FGF1蛋白,并且表达的蛋白具有促细胞增殖的活性。为了以后制作无筛选标记的转基因动物,我们将两个同向的loxP位点插入到了标记基因(EGFP和puro)的两侧。经EGFP和puro筛选得到的细胞系,在转入Cre重组酶表达载体后,loxP位点间的标记基因被删除,通过FACS系统分析发现转染后EGFP阳性细胞的比例降低,验证了该载体可用于标记基因的删除。此外,在FGF1基因两侧引入了突变的lox位点,用于Cre介导的交换系统。将获得的表达FGF1的细胞系同时转入Cre表达载体和含有tdTomato基因的置换载体,经荧光显微镜观察到呈现红色荧光的细胞,证明tdTomato基因可以通过Cre介导的交换系统替换FGF1基因,说明该载体可以通过Cre介导的交换作用来制作其他基因的乳腺反应器。