七氟醚复合浅低温对大鼠海马脑片缺氧无糖损伤的保护作用

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本研究分为二部分: 第一部分 七氟醚复合浅低温对大鼠海马脑片缺氧无糖损伤的保护作用 目的: 利用离体海马脑片缺氧无糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤模型探讨七氟醚(sevoflurane,sev)复合浅低温处理对神经细胞的保护作用。 方法: 大鼠乙醚麻醉后迅速断头取脑,低温分离海马并沿矢状面将其切成0.4mm厚的脑片,放入人工脑脊液(ACSF)中孵育备用,孵育好的海马脑片被随机分为6组(n=8):OGD Ⅰ组,2%sevⅠ组,4%sevⅠ组,OGDⅡ组,2%sevⅡ组,4%sevⅡ组(Ⅰ37℃,Ⅱ 32℃)。2%,4%七氟醚复合不同温度在缺氧前14min持续至缺氧期14min对海马脑片进行处理,观察各组OGD损伤期间和复氧1h后顺向群锋电位(orthodromicpopulation spike,OPS)的变化,并且测定复氧1h后孵育液乳酸脱氢酶(Lactatedehydrogenase,LDH)释放率。 结果: ①在Ⅰ组中,与OGD Ⅰ组相比,2%sev Ⅰ组和4%sev Ⅰ组OPS消失时间有延长趋势,OPS恢复程度和恢复率有提高趋势,LDH释放率有降低趋势;②七氟醚复合浅低温后,与OGD Ⅱ组相比,2%sev Ⅱ组和4%sev Ⅱ组OPS消失时间显著延长(P<0.01):4%sev Ⅱ组OPS恢复程度和恢复率均提高(P<0.05),LDH释放率显著降低(P<0.01) ③ 2%sev Ⅱ组与2%sev Ⅰ组相比,OPS消失时间延长(P<0.01),OPS恢复程度和OPSt恢复率有增加趋势,LDH释放率显著降低(P<0.01);4%sev Ⅱ与4%sev Ⅰ组相比,OPS消失时间(P<0.01)、OPS恢复程度(P<0.05)、OPS恢复率(P<0.05)以及LDH释放率(P<0.01)均有差异。 结论: 4%七氟醚复合浅低温处理大鼠海马脑片后脑保护效应得到强化。 第二部分 七氟醚复合浅低温对大鼠海马脑片缺氧无糖损伤细胞外液氨基酸水平的影响 目的: 在离体海马脑片缺氧无糖损伤模型基础上用高效液相技术研究七氟醚复合浅低温对海马脑片OGD损伤细胞外液氨基酸水平的影响 方法: 孵育好的海马脑片被随机分为6组(n=8),即OGDⅠ组,2%sev Ⅰ组,4%sev Ⅰ组,OGD Ⅱ组,2%sev Ⅱ组,4%sev Ⅱ组(Ⅰ 37℃,Ⅱ 32℃)。2%,4%七氟醚复合不同温度处理下使海马脑片经历OGD损伤,采用反相高效液相(high-performance liquid chromatography,HPLC)荧光检测法检测OGD损伤开始之前、OGD结束即时、复氧复糖30min和60min时五种氨基酸即天门冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、牛磺酸(Tau)、甘氨酸(Gly)和γ-氨基丁酸(GABA)的浓度。 结果: 在OGD损伤开始之前各组五种氨基酸浓度无明显差异,OGD损伤结束之后五种氨基酸浓度均显著增加(P<0.01),在Ⅰ组内,与OGD Ⅰ组各个时间点相比,2%sevⅠ组和4%sev Ⅰ组OGD结束后各个时间点Glu、Asp和Gly含量均有降低趋势,而Tau和GABA有增加趋势更明显;在Ⅱ组内,与OGD Ⅱ组各个时间点相比,2%sev Ⅱ组各个时间点Glu、Asp和Gly含量有降低趋势,Tau和GABA含量则有增加趋势,4%sevⅡ组G1u和Asp各个时间点含量降低(P<0.05),OGD结束即时Tau和OGD结束后各个时间点GABA含量增加(P<0.05),Gly含量各个时间点有下降趋势;而OGD Ⅱ组OGD结束后各个时间点Glu和Asp较OGD Ⅰ组含量降低(P<0.05),Tau和GABA含量增加(P<0.05),Gly含量有下降趋势。甚至2%sev Ⅱ组与4%sev Ⅰ组比较,Glu、Asp和Gly含量有降低趋势而Tau和GABA含量则有升高趋势。在同一组内比较,Glu、Asp和Gly含量随着复氧时间延长而有降低趋势,而Tau和GABA含量则随着时间延续而有升高趋势。 结论: 4%七氟醚复合浅低温后抗海马脑片OGD损伤作用得到加强,其作用机制可能降低EAAs毒性,机体建立相应的“抑制性保护”有关。
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