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5,10-亚甲基四氢叶酸脱氢酶(5,10-methylene-tetrahydrofolate dehydrogenase,DHY)和5,10-次甲基四氢叶酸环化酶(5,10-methenyl- tetrahydrofolatecyclohydrolase,CYC)是在5,10-亚甲基四氢叶酸盐(5,10-methylene-tetrahydrofolate)和10-甲酰基四氢叶酸盐(10-formyl-tetrahydrofolate)相互转换过程中起重要作用的酶。本文首先采用RT-PCR技术从拟南芥中分离获得三个DHY/CYC基因的cDNA序列,然后通过对这三个DHY/CYC进行原核表达以对它们的酶活性进行检测,并对这三个基因的拟南芥过表达植株进行分析以利于对其生物功能的了解。主要研究结果如下:1根据豌豆DHY/CYC cDNA序列设计引物,用RT-PCR的方法,从拟南芥中分离到3个cDNA序列,分别为906bp、1065bp和1101bp,依次命名为FL1、FL2和FL3。经BLAST比对发现,FL1、FL2和FL3的氨基酸序列与豌豆的DHY/CYC序列的同源性分别为81%、64%和64%,表明这三个cDNA均可能编码DHY/CYC蛋白;2利用Gateway技术将FL1、FL2、FL3克隆到过表达载体pK7WG2,成功构建了FL1、FL2和FL3的过表达载体,并通过花沾法侵染拟南芥野生型,获得阳性转基因株系并对其进行分析。3将FL1、FL2和FL3序列克隆到原核表达载体pET-30a,转入大肠杆菌表达菌株Rossette,经IPTG诱导表达后SDS-PAGE检测表明,三个基因均有表达。FL1、FL2和FL3编码蛋白对应条带大小分别为39.4KD、45KD和46KD,与预期结果一致。4采用高效液相色谱电喷雾电离串联质谱(HPLC-nESI-MS/MS)对上述39.4KD、45KD和46KD条带进行分析,结果表明FL1、FL2和FL3基因编码蛋白的氨基酸序列与预测相一致。