双歧杆菌为益生菌,主要应用于近年来出现的新型绿色饲料添加剂,它具有无毒副作用,无残留,无抗药性,不污染环境等特点。其主要作用是在数量或种类上补充肠道内减少或缺乏的正常微生物,恢复肠道内的微生态平衡,以达到保健的目的。细菌活的非可培养状态(viable but nonculturable state,VBNC)是细菌处于不良环境条件下的一种特殊存活形式,用常规方法培养不能生长繁殖,但仍然是活的,且具有代谢活性的一种特殊的细菌存活形式,并且这种状态的细菌在适当的条件下可恢复为可培养状态。本试验旨在研究双歧杆菌的VBNC状态,将其引入到益生素的研究之中,为研制新型实用的防病治病的益生菌活菌制剂开辟一条新径。试验对购自中国微生物菌种保藏中心的双歧杆菌进行了活的非可培养状态的初步研究,并且结合多种检测方法,摸索出了双歧杆菌进入非可培养状态的稳定条件,并且对双歧杆菌进行生理生化、16sRNA等检测方法的鉴定,最终证明了用于诱导的细菌确实为双歧杆菌。将双歧杆菌悬浮于液体LB培养基,pH7,置于4℃的低温下厌氧静止培养,双歧杆菌即可进入活的非可培养状态。第15天时双歧杆菌进入活的非可培养状态,维持此状态可至第100天。LB培养基进行诱导比TPY等培养基节省资源,降低成本,且配制简单,使用方便,易于保存。利用双歧杆菌的生理生化性状检测和鉴定双歧杆菌的方法是最早用于检测和鉴定双歧杆菌的方法,也是目前较可信的方法。鉴定结果为所有生理生化反应的指标与双歧杆菌的理论指标完全吻合,可初步确定此细菌为双歧杆菌。细菌的16SrRNA恒定区序列基本保守,所以利用双歧杆菌恒定区序列设计引物将16SrRNA片断扩增出来,并可通过对其序列的分析,其同源性为99.2%,最终判定用于试验的细菌为双歧杆菌。