【摘 要】
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完整的血管内皮细胞对血管的正常功能至关重要。由于化学暴露或物理损伤（如血管成形术或支架植入）会导致血管损伤,原有内皮细胞的迁移和增殖是损伤修复的必要条件。在应激刺激或细胞受损后HMGB1会被释放到细胞外,作为损伤相关分子模式,参与炎症反应,迁移,增殖以及组织再生。HMGB1可以作为促血管生成因子,通过刺激血管内皮细胞的萌发和迁移来促进血管生成进而促进损伤的修复。VEGFA以及FGF-2可以参与血管
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完整的血管内皮细胞对血管的正常功能至关重要。由于化学暴露或物理损伤（如血管成形术或支架植入）会导致血管损伤,原有内皮细胞的迁移和增殖是损伤修复的必要条件。在应激刺激或细胞受损后HMGB1会被释放到细胞外,作为损伤相关分子模式,参与炎症反应,迁移,增殖以及组织再生。HMGB1可以作为促血管生成因子,通过刺激血管内皮细胞的萌发和迁移来促进血管生成进而促进损伤的修复。VEGFA以及FGF-2可以参与血管内皮的增殖,迁移以及血管化。本文针对HMGB1在血管内皮修复中对细胞迁移作用进行实验研究,主要研究内容和结论如下:（1）从脐静脉中分离HUVECs。采用胶原酶灌注消化法进行HUVECs的分离,通过细胞形态观察、细胞增殖活性检测、细胞成管能力检测以及细胞特异性蛋白检测等手段对实验细胞进行鉴定。本研究成功从脐静脉中分离提取出原代细胞,细胞由起始的梭形或多边形增长为融合的卵石样;生长曲线呈“S”曲线生长,表明细胞具有良好的活性;在基质胶上细胞融合60%-80%时,形成管腔结构,具有形成血管的能力。吞噬荧光标记的乙酰低密度脂蛋白、胞内内皮细胞特征蛋白VWF以及CD31,鉴定提取的细胞呈阳性,表明本研究方法提取的细胞为人脐静脉内皮细胞。（2）研究不同浓度HMGB1对HUVECs增殖以及迁移的影响。体外构建HMGB1浓度梯度,CCK-8法测定HUVECs的增殖能力、划痕创面愈合实验以及Transwell迁移小室实验测定HUVECs的迁移能力。细胞增殖实验结果显示不同浓度HMGB1对HUVECs的增殖影响差异较小。细胞划痕结果显示,创面愈合率和细胞迁移率随着HMGB1浓度的增加而逐渐增加,且Transwell小室实验显示穿过小室的细胞数量随HMGB1浓度的增加而增多。（3）研究不同浓度HMGB1对HUVECs的VEGFA和FGF-2分泌、基因以及蛋白的影响。体外构建HMGB1浓度梯度,RT-q PCR、Western Blot以及ELISA测定HUVECs中VEGFA和FGF-2的基因、蛋白以及分泌表达的影响。HUVECs胞外蛋白分泌检测结果显示,培养液中VEGFA的含量各组间变化较小,差异无统计学意义。长时间高浓度作用HUVECs时,细胞内的VEGFA基因与蛋白表达与对照组比较降低,差异具有统计学意义。各浓度HMGB1作用HUVECs均可引起细胞内FGF-2基因与蛋白表达的升高,差异有统计学意义。同一浓度HMGB1作用下48 h与12 h以及24 h相比,细胞内FGF-2基因与蛋白表达稍有降低。仅两组高浓度的HMGB1作用时,胞外FGF-2的水平会升高。本研究通过优化的酶灌注消化法,可成功提取HUVECs。HMGB1对HUVECs的增殖影响较小,不同浓度HMGB1对HUVECs的迁移能力均有促进作用,且呈浓度和时间依赖性,为寻找血管损伤后具有促进修复作用的新治疗靶点提供实验依据。
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