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目的:急性肝损伤是各种因素导致的肝脏急性损害,转氨酶升高,肝功能异常。双环醇已在临床上广泛应用,有明确的保肝降酶效果。既往已发现的双环醇保肝机制有:保护肝细胞膜和线粒体功能,清除自由基,抑制内质网应激,诱导热休克蛋白表达,抑制炎症因子释放等。自噬是真核细胞在遭遇饥饿、损伤、缺氧等影响细胞生存的条件下产生的一种自我保护机制。既往研究中发现在急性肝损伤中有自噬的发生。双环醇保肝机制是否有自噬参与研究尚少。本研究用CCl4诱导C57BL/6小鼠急性肝损伤并加用双环醇预保护,评估双环醇对小鼠肝脏自噬通路及抗氧化应激相关通路指标的影响。探索自噬及抗氧化应激在双环醇保肝机制中所起的作用。方法:1、动物实验:腹腔注射体积比50%的CCl4 40ul诱发急性肝损的模型。30只6-8周龄的雄性C57BL/6小鼠随机分成五组:正常组,CCl4 24 h组,CCl4 48 h组,CCl4+双环醇24 h组,CCl4+双环醇48 h组。于CCl4给药后24h、48h分别处死相应组小鼠,留取血及肝脏标本,检测血清ALT变化。HE染色评价鼠肝的病理结构的变化。Western Blot检测肝脏自噬通路相关蛋白Atg12、Atg7、Atg5、p62、LC3、Beclin-1、mTOR等的改变情况。透射电镜观察肝细胞内自噬体及自噬溶酶体的变化。RT-PCR检测抗氧化应激相关分子在mRNA水平的变化。2、细胞实验:使用HepG2细胞诱导细胞损伤模型,双环醇或3-MA预先处理。CCl4刺激2h后提蛋白,Western Blot检测mTOR、p62、LC3等自噬相关蛋白的表达。将已构建好的GFP-LC3质粒转染进HepG2细胞,单用双环醇刺激及合用双环醇和3-MA刺激细胞进行比较。荧光显微镜下观察拍照并计数绿色荧光点的数量。3、全部数据应用SPSS20.0软件分析,p<0.05认为有统计学意义。结果:1、动物实验中,通过血清学分析发现,CCl4造模组小鼠血清ALT较正常组明显升高（P<0.001）,CCl4造模后双环醇治疗组ALT较造模组显著降低（P<0.001）。通过病理学分析发现,正常组小鼠肝脏病理未见异常,CCl4造模组小鼠肝脏病理可见细胞变性坏死,双环醇治疗组病理显示变性坏死得到明显修复。2、动物实验中,将肝组织蛋白提取,进行自噬相关蛋白分析发现,与正常组和CCl4造模48h组比,双环醇治疗24h及48h组Atg7、LC3 II、Beclin-1、p62在蛋白水平明显升高,P-mTOR明显下降（P<0.05）。CCl4造模24h组也可见p62及LC3 II蛋白水平升高。Atg5和Atg12未见显著改变。3、动物实验中,提取肝组织mRNA,进行基因水平分析发现,与正常组和CCl4造模组比,CCl4+双环醇治疗组肝组织的抗氧化应激相关分子HO-1、NQO1、GSTA-1在mRNA水平明显升高,Keap1及p62在mRNA水平也上调（P<0.01）。4、细胞实验中,与正常组相比,CCl4+双环醇治疗组p62、P-mTOR蛋白水平下调,LC3 II上调（P<0.05）,以上变化可被自噬抑制剂3-MA逆转。荧光显微镜下进一步验证,向HepG2细胞转染载有GFP-LC3基因的质粒,双环醇治疗组绿色荧光点（表示自噬体）较正常组明显增多,加3-MA抑制后荧光点数量减少（P<0.01）。结论:在急性肝损伤治疗中,双环醇可使血清ALT明显下降,使变性坏死的肝组织明显改善。这种改善与自噬通路相关,其中自噬相关蛋白Atg7、LC3 II、Beclin-1、p62、P-mTOR起到关键作用。同时发现该通路中p62与Keap1-Nrf2抗氧化应激通路有关,与其下游HO-1、NQO1、GSTA-1分子相关,进而使肝细胞抗氧化应激能力增强。总之,双环醇通过上调肝细胞自噬水平及加强抗氧化应激能力来保护CCl4诱导的急性肝损伤。