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目的通过观察醛固酮(Aldosterone,ALD)刺激对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(Mesangial cells,MsC)活性氧(Reactive oxygen species,ROS)产生及纤溶酶原激活物抑制物-1(Plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)mRNA、蛋白表达的影响,以及不同浓度的醛固酮受体拮抗剂螺内酯(Spironolactone,SPI)干预后的效应,探讨醛固酮致糖尿病肾病(Diabetic nephropathy, DN)的发病机制及螺内酯的肾脏保护机制。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,随机分组如下:①Con组:正常对照组(低糖DMEM培养液葡萄糖浓度为5.6 mmol/L);②ALD组:醛固酮刺激组, ALD 1组:低糖DMEM培养液中加入醛固酮(10-5 mol/L)刺激; ALD 2组:低糖DMEM培养液中加入醛固酮(10-7 mol/L)刺激; ALD 3组:低糖DMEM培养液中加入醛固酮(10-9 mol/L)刺激;③SPI组:螺内酯干预组, SPI 1组:醛固酮(10-7 mol/L)刺激的同时加入螺内酯(10-7 mol/L)干预; SPI 2组:醛固酮(10-7 mol/L)刺激的同时加入螺内酯(10-8 mol/L)干预; SPI 3组:醛固酮(10-7 mol/L)刺激的同时加入螺内酯(10-9 mol/L)干预;以2’,7’-二氯双氢荧光素二乙酸酯( 2’,7’- dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA)为荧光探针,采用流式细胞仪法检测系膜细胞内活性氧(ROS)水平。以逆转录PCR法(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-RCR)检测纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、醛固酮合成酶(CYP11B2)、醛固酮受体(Mineralocorticoid receptor,MR)和保护其配体特异性的11β-羟类固醇脱氢酶2(11β-hydroxysteroid dehydrogenase 2,11β-HSD2)的mRNA表达,采用酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbentassay,ELISA)检测培养系膜细胞上清液中PAI-1蛋白的浓度。结果1 RT-PCR检测结果显示系膜细胞表达醛固酮合成酶(CYP11B2)、醛固酮受体(MR)和保护其配体特异性的11β-羟类固醇脱氢酶2(11β-HSD2)的mRNA。2醛固酮对系膜细胞内ROS产生的影响醛固酮刺激系膜细胞48h后,细胞内ROS水平明显增加,ALD 1,2,3组分别为21.77±0.87、17.33±0.49、15.25±0.63,组间差异显著,P<0.01;与Con组(4.28±0.50)相比,差异显著(P<0.01)。3醛固酮对系膜细胞PAI-1 mRNA表达的影响经半定量RT-PCR检测发现,Con组系膜细胞可低水平(1.11±0.07)表达PAI-1 mRNA。醛固酮作用48 h后,PAI-1 mRNA表达明显增强,ALD 1,2,3组分别为1.95±0.06、1.71±0.09、1.63±0.07,组间差异显著,P<0.05;与Con组相比,差异显著(P<0.01)。4醛固酮对系膜细胞PAI-1蛋白分泌的影响ELISA结果显示,醛固酮刺激48 h后,ALD 1,2,3组上清液中PAI-1蛋白浓度分别为:2.01±0.06 ng/ml、1.52±0.11 ng/ml、1.31±0.08 ng/ml,组间差异显著,P<0.05;均明显高于Con组(0.35±0.02 ng/ml),P<0.01。5螺内酯对醛固酮诱导的系膜细胞内ROS产生的影响醛固酮(10-7 mol/L)刺激的同时加入螺内酯干预后,SPI 1,2,3组细胞内ROS水平分别为7.34±0.89、9.25±0.65、10.9±0.97,组间差异显著,P<0.01;与ALD 2组(17.33±0.49)相比,差异显著(P<0.01)。6螺内酯对醛固酮诱导的系膜细胞PAI-1 mRNA表达的影响醛固酮(10-7 mol/L)刺激的同时加入螺内酯干预后,SPI 1,2,3组系膜细胞PAI-1 mRNA的表达分别为1.18±0.10、1.38±0.10、1.50±0.11,组间差异显著,P<0.05;与ALD 2组(1.71±0.09)相比,差异显著(P<0.05)。7螺内酯对醛固酮诱导的系膜细胞PAI-1蛋白分泌的影响醛固酮(10-7 mol/L)刺激的同时加入螺内酯干预后,SPI 1,2,3组上清液中PAI-1蛋白浓度分别为0.41±0.03 ng/ml、0.72±0.05 ng/ml、1.08±0.08 ng/ml,组间差异显著,P<0.05;与ALD 2组(1.52±0.11 ng/ml)相比,差异显著(P<0.01)。8系膜细胞ROS产生和PAI-1 mRNA表达的相关性分析系膜细胞产生的ROS和表达的PAI-1 mRNA呈正相关(r=0.931,P<0.01)。9系膜细胞ROS产生和PAI-1蛋白分泌的相关性分析系膜细胞产生的ROS和分泌的PAI-1蛋白呈正相关(r=0.976,P<0.01)。结论醛固酮可与肾小球系膜细胞MR特异性结合,诱导系膜细胞内ROS产生增多、PAI-1 mRNA和蛋白表达增加,并具有剂量依赖性;螺内酯呈剂量依赖性抑制醛固酮诱导的系膜细胞内ROS产生增多、PAI-1 mRNA和蛋白表达增加,该作用可能是其肾脏保护的机制之一。