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背景:中性粒细胞(Neutrophil)又称多形核嗜中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophil,PMN),属于非特异性免疫应答细胞。大量研究表明,作为内源性竞争性RNA,LncRNA(Long non-coding RNA,lncRNA)与PMN的生长、分化和发育有密切联系,但具体调控机制和作用机理尚不完全清楚。本课题组前期研究首次构建了一个PMN自发性凋亡过程中的lncRNA-miRNA-mRNA内源竞争性RNA网络(lncRNAmiRNA-mRNA ceRNA net),并获得了多个相关性极强的调控子网络。在这些调控子网络中LncHCG18-miR-148b-3p-NFκB1内源竞争性RNA网络引起了我们的注意。随着PMN自发性凋亡进行,位于6号染色体30、287、397-30、327、150的LncHCG18显著上调表达,差异高达13倍。采用亚细胞定位数据库分析预测显示,LncHCG18可能定位在PMN胞浆中。LncHCG18可能对PMN细胞凋亡有影响,但相关文献报道较少。然而,LncHCG18是否能够调节PMN相关生物学功能并发挥相应的免疫调节作用,有待进一步研究。
目的:本研究应用RNA干扰技术沉默健康人PMN中LncHCG18的表达,进一步观察LncHCG18对PMN凋亡及相关生物学功能如趋化迁移能力、活性氧释放和吞噬能力的影响。
方法:分离并提取健康人PMN,将各组基因片段通过电穿孔转染至PMN。实验分为4组,分别是si-HCG18组(转染si-HCG18)、NC组(转染si-con)、BLANK组(空白对照组)和WT组(未转染组)。采用Realtime PCR技术检测各组PMN中LncHCG18表达情况。通过Transwell迁移实验分析PMN迁移、侵袭能力;通过CCK-8实验检测分析各组PMN细胞活力;通过Reactive Oxygen Species Assay Kit试剂盒,检测各组PMN释放ROS的能力;通过流式细胞术AnnexinⅤ/PI双染色法检测判断各组PMN凋亡情况;通过与金黄色葡萄球菌共同培养使用瑞氏-吉姆萨复合染色液(Wirhgt-Gemsa)检测分析各组PMN的吞噬能力。
结果:转染si-HCG18后,采用Realtime PCR技术检测到PMN中LncHCG18的表达显著降低(P<0.05)。流式细胞术AnnexinⅤ/PI双染色法检测实验表明沉默LncHCG18的表达能显著促进PMN凋亡(P<0.05);PMN Transwell趋化迁移实验分析,si-HCG18组PMN趋化迁移能力显著降低(P<0.05);CCK-8实验检测PMN活力分析:si-HCG18组PMN细胞活力明显降低(P<0.05);PMN活性氧检测分析:si-HCG18组PMN的ROS荧光强度显著降低(P<0.05);PMN吞噬能力分析:si-HCG18组PMN的吞噬率和吞噬指数水平均显著降低(P<0.05)。
结论:沉默LncHCG18的表达显著促进PMN凋亡,并抑制其趋化迁移能力、吞噬能力以及ROS释放等生物学功能。其作用机制可能与LncHCG18-miR148b3p-NFκB1ceRNA调控网络有关,将可为从lncRNA角度探索PMN凋亡调控机制和选择炎症治疗靶点提供重要理论依据。
目的:本研究应用RNA干扰技术沉默健康人PMN中LncHCG18的表达,进一步观察LncHCG18对PMN凋亡及相关生物学功能如趋化迁移能力、活性氧释放和吞噬能力的影响。
方法:分离并提取健康人PMN,将各组基因片段通过电穿孔转染至PMN。实验分为4组,分别是si-HCG18组(转染si-HCG18)、NC组(转染si-con)、BLANK组(空白对照组)和WT组(未转染组)。采用Realtime PCR技术检测各组PMN中LncHCG18表达情况。通过Transwell迁移实验分析PMN迁移、侵袭能力;通过CCK-8实验检测分析各组PMN细胞活力;通过Reactive Oxygen Species Assay Kit试剂盒,检测各组PMN释放ROS的能力;通过流式细胞术AnnexinⅤ/PI双染色法检测判断各组PMN凋亡情况;通过与金黄色葡萄球菌共同培养使用瑞氏-吉姆萨复合染色液(Wirhgt-Gemsa)检测分析各组PMN的吞噬能力。
结果:转染si-HCG18后,采用Realtime PCR技术检测到PMN中LncHCG18的表达显著降低(P<0.05)。流式细胞术AnnexinⅤ/PI双染色法检测实验表明沉默LncHCG18的表达能显著促进PMN凋亡(P<0.05);PMN Transwell趋化迁移实验分析,si-HCG18组PMN趋化迁移能力显著降低(P<0.05);CCK-8实验检测PMN活力分析:si-HCG18组PMN细胞活力明显降低(P<0.05);PMN活性氧检测分析:si-HCG18组PMN的ROS荧光强度显著降低(P<0.05);PMN吞噬能力分析:si-HCG18组PMN的吞噬率和吞噬指数水平均显著降低(P<0.05)。
结论:沉默LncHCG18的表达显著促进PMN凋亡,并抑制其趋化迁移能力、吞噬能力以及ROS释放等生物学功能。其作用机制可能与LncHCG18-miR148b3p-NFκB1ceRNA调控网络有关,将可为从lncRNA角度探索PMN凋亡调控机制和选择炎症治疗靶点提供重要理论依据。