[目的]　　 鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)是我国华南地区的高发性恶性肿瘤，研究表明其发病除与EB病毒感染、化学致癌物有关外，与遗传易感基因也有密切的关系。近年来，RNA干扰(RNA interference，RNAi)的研究进展非常迅速，这项技术极有可能用于肿瘤临床治疗。本研究拟从基因治疗的角度出发，首先在细胞水平上研究以RNAi的方式抑制人鼻咽癌低分化细胞株CNE-2中人端粒酶末端逆转录酶(human telomerase reverse transcriplase，hTERT)和Bax抑制因子-1(Bax inhibitor-1，Bi-1)基因的表达对细胞增殖和凋亡的影响，其次通过建立鼻咽癌裸鼠移植瘤模型从动物整体水平研究以RNAi方式抑制上述两个靶基因后基因表达的变化和对肿瘤生长的影响，从而探讨治疗鼻咽癌的新策略。　　 [方法]　　 首先，用以前筛选构建的重组质粒：即以pcDNA3.1(+)为载体构建的含T7启动子的shRNA真核表达载体shRNA-TR、shRNA-Bi-1、shRNA-TR-Bi-1和各自的阴性对照载体，hTERT和Bi-1基因的最佳干扰靶点为(hTERT，gi：AF015950，2474～2492位；Bi-1，gi：23271944，738～760位)。用LipofectamineTM2000(Lip)将各重组质粒转染至鼻咽癌细胞株CNE-2内，并用流式细胞术(FCM)检测转染率；用MTT法观察干扰载体及转染试剂对CNE-2细胞生长增殖的影响；测量Caspase-3活性并结合FCM来检测细胞凋亡；用Real-Time PCR法检测shRNA重组质粒对hTERT和Bi-1基因表达的抑制效果；用Western-blot观察抑制相关基因后其蛋白质表达的变化；采用Hoechst33258染色，并用荧光显微镜观察鼻咽癌细胞形态学的变化；用细胞创伤愈合实验观察细胞迁移能力的变化；用软琼脂克隆形成实验观察细胞克隆形成能力。　　 其次，建立鼻咽癌裸鼠移植瘤模型；用上述重组质粒与Lip的混合物瘤内注射后测量肿瘤体积及计算肿瘤生长抑制率，绘制生长曲线；用HE染色观察瘤组织病理改变；用Real-time PCR法检测各重组质粒作用瘤组织后hTERT和Bi-1基因mRNA表达情况；用免疫组化检测各重组质粒作用瘤组织后hTERT和Bi-1蛋白的表达情况；并用TUNEL法检查肿瘤组织细胞凋亡。　　 [结果]　　 体外水平结果：Lip对质粒pEGFP-N1的转染率为66.26％。分别转染7种shRNA的重组质粒(pcDNA3.1(+)、shRNA-TR、shRNA-TRs、shRNA-Bi-1、shRNA-Bi-1s、shRNA-TR-Bi-1、shRNA-TR-Bi-1s)后，shRNA-TR、shRNA-Bi-1和shRNA-TR-Bi-1组的CNE-2细胞生长增殖能力降低，其中shRNA-TR-Bi-1组的生长增殖能力最低(P<0.01)；转染shRNA-TR、shRNA-Bi-1和shRNA-TR-Bi-1重组质粒后，荧光显微镜下可见部分鼻咽癌细胞出现典型的凋亡形态学变化；与未处理组相比，shRNA-TR、shRNA-Bi-1和shRNA-TR-Bi-1组中hTERT和Bi-1的mRNA表达水平明显下调(P<0.01)且蛋白的表达也相应减弱。细胞的迁移能力、克隆形成能力均有所降低，其中以shRNA-TR-Bi-1组更明显(P<0.05)。　　 体内观察结果：成功建立鼻咽癌移植瘤模型：与未处理组、Lip组和pcDNA3.1(+)相比，用各重组质粒与脂质体的复合物治疗后，shRNA-TR、shRNA-Bi-1和shRNA-TR-Bi-1组的瘤体积增长减慢，瘤组织出现细胞凋亡现象及病理性改变，以shRNA-TR-Bi-1组更明显；shRNA-TR、shRNA-Bi-1和shRNA-TR-Bi-1组中瘤组织hTERT和Bi-1的mRNA表达水平显著下调(P<0.01)且蛋白表达也相应减弱。　　 [结论]　　 Lip介导靶向作用人hTERT和Bi-1基因的重组干扰质粒在体外能特异、有效地阻抑目的基因的表达，鼻咽癌细胞株CNE-2的增殖、迁移，克隆形成能力受到一定的抑制，出现明显的细胞凋亡；在体内同样也能阻抑靶基因的表达，鼻咽癌移植瘤的生长减慢。