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背景肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是全球第二大癌症杀手,发病率和死亡率逐年上升。根治性肝切除和肝移植(Liver transplantation,LT)是早期肝癌最主要的治疗手段,然而大部分患者确诊肝癌时已处于晚期,尽管采用了以手术为主化疗为辅的综合治疗方式,但是患者术后的总体生存时间和无瘤生存时间仍旧不太理想。甲胎蛋白是肝癌诊断和预后预测的常用标志物,然而大多数患者的病程进展与甲胎蛋白的关系并不完全相关,因此,寻找新型分子标志物、构建新型肿瘤早期诊断和预后预测体系、提高肝癌患者的总体生存时间是现阶段肝癌治疗亟待解决的难题。目的本研究利用TCGA、human protein atlas数据库以及文献检索方式筛选与肝癌术后预后相关的潜在分子标志物。并通过组织水平、细胞水平、动物水平以及分子水平系统阐述所选分子标志物在肝癌发生发展过程的作用以及相应的分子机制。方法1.收集71例肝癌患者癌组织及相应的癌旁组织,然后利用免疫组化检测Mybbp1a的表达差异,并利用13分法对其表达进行量化评分,分析癌和癌旁组织的表达差异;利用蛋白印记检测肝癌细胞系和正常永生化肝细胞Mybbp1a表达差异。2.根据免疫组化评分结果分析Mybbp1a表达与肝癌患者临床病理特征、总体生存时间、无瘤生存时间相关性,并分析Mybbp1a是否是肝癌预后独立危险因素。3、通过构建Mybbp1a低表达肝癌稳定转染细胞株,利用CCK-8、Edu、克隆形成、裸鼠皮下成瘤实验、流式周期分析和蛋白印记实验研究Mybbp1a与肝癌细胞增殖能力的关系;利用transwell、划痕实验、裸鼠尾静脉肺转移模型、细胞骨架染色和蛋白印记实验研究Mybbp1a与肝癌细胞转移能力的关系。4、利用表达谱芯片筛选Mybbp1a下游调控信号通路,通过CCK-8、transwell和蛋白印记等补救实验来验证所得结果;利用表达谱芯片筛选Mybbp1a下游调控分子,通过small RNA测序、亚硫酸盐特异性甲基化测序和焦磷酸测序来研究Mybbp1a调控下游基因表达的分子机制。结果1、免疫组化分析结果显示Mybbp1a在肝癌中明显高表达;蛋白印记实验显示Mybbp1a在肝癌细胞系中表达明显高于正常永生化肝细胞。2、单因素分析结果显示Mybbp1a表达与肝癌患者临床病理特征并无显著相关性,但是Kaplan-meier分析结果显示Mybbp1a表达水平与肝癌患者总体生存时间和无瘤生存时间具有相关性(p=0.014和p=0.010),Coxregression多因素分析结果显示Mybbp 1 a是肝癌患者预后独立危险因素(HR(95%CI):3.549(1.312-9.599)和 2.332(1.126-4.828),p=0.013 和 p=0.023)。3、细胞功能学实验显示,低表达Mybbp1a能够通过影响细胞G1期进展和细胞骨架合成来抑制肝癌细胞的增殖和转移能力;体内实验显示,低表达Mybbp1a后肝癌细胞皮下成瘤能力和肺转移能力明显减弱。4、表达谱芯片发现Mybbp1a主要通过调控PI3K/AKT通路来影响肝癌细胞的增殖和转移能力;进一步研究发现Mybbp1a主要通过抑制IGFBP5分泌来促进IGF1介导的PI3K/AKT信号通路的活化;small RNA测序、亚硫酸盐特异性甲基化测序和焦磷酸测序结果显示Mybbp1a主要通过促进CDS区域CpG岛(CpGi)甲基化来抑制肝癌细胞IGFBP5的转录。结论1、Mybbp1a在肝癌组织中表达水平明显高于癌旁组织,这提示Mybbp1a与肝癌发生发展存在相关性。2、Mybbp1a高表达的肝癌患者术后总体生存时间和无瘤生存时间差于低表达患者,且Mybbp1a是肝癌患者术后预后独立的危险因素。Mybbp1a有可能成为肝癌术后预后预测的潜在分子标志物。3、在肝癌细胞中,Mybbp1a能够通过促进CDS区域CpG岛甲基化来抑制IGFBP5分泌,进而激活IGF1介导的PI3K/AKT信号通路的活化,最终促进肝癌细胞的增殖和转移。