胆盐水解酶BSH是人体肠道菌株中普遍存在的酶。国内外关于bsh基因克隆表达的报道较多,先后有文献报道了 bsh基因在大肠杆菌、乳球菌和酵母菌中的表达,但表达效果各不相同。本课题建立了bsh基因在植物乳杆菌中重组表达的方法,具体如下:采用宏基因组的研究手段,以健康ICF小鼠粪便总基因组为模板,扩增了多个不同肠道菌株来源bsh基因;选择可以在植物乳杆菌中诱导表达型质粒pSIP系列,构建bsh表达质粒;采用基于Cre-lox-Based system的Selectable-Marker Removal基因敲除技术,将宿主植物乳杆菌中的bsh基因敲除,该结果不仅消除了宿主自身bsh基因产物的干扰,同时由于抗性筛选标记在宿主染色体上的成功移除,提高了基因表达检测的准确性;通过SDS-PAGE、Western-Blot 方法验证了 基因在植物乳杆菌 Y1 Δ 中成功表达。在此基础上,本课题对构建获得的多个bsh基因重组菌进行了 BSH酶活性测定。首先建立了优化的茚三酮法测定BSH酶活性方法。该方法操作性强、重复性高。随后,对BSH重组菌产酶条件进行优化研究,确定最佳产酶条件。最终,本研究测定了 4株不同bsh基因来源的重组菌WB461～WB464的BSH酶活性,结果表明重组菌中bsh基因均表达产生BSH酶,其中,含罗伊氏乳杆菌bsh基因的WB462菌株BSH酶活性最高(1.725U/mL)。综上所述,本课题的研究成功实现了 bsh基因在植物乳杆菌中的高效表达,为更多的bsh基因的重组表达研究提供有效途径,同时本研究获得bsh基因差异表达方法,也为进一步开展BSH新功能的研究奠定基础。