论文部分内容阅读
对虾疾病在世界范围内的频频爆发,给地区经济造成了重大损失。然而到目前为止,我们对于对虾免疫系统的分子机制还知之甚少,深入了解其免疫应答过程,包括异物识别,信息传递以及作用方式等是从根本上解决疾病问题的关键之一。甲壳动物具有开放的循环系统,它们必须通过有效的凝结系统来封固伤口以防止血淋巴的损失以及捕获病原微生物防止它们扩散进入血腔。C型凝集素(C-type lectin)作为宿主防御系统中的一种模式识别受体,在病原识别和细胞间的相互作用上具有重要作用,此外它们还参与止血、凝固、物质运输和创伤修复等一系列作用;谷氨酰胺转移酶(TG)和丝氨酸蛋白酶(SP)及其抑制剂(SPI)家族分别是在无脊椎动物中发现的两种凝结机制中的主要参与者。本论文从中国明对虾血细胞中分别克隆了一种C型凝集素基因(Fclectin)、参与凝结过程的谷氨酰胺转移酶基因(FcTG)以及参与凝结级联反应和酚氧化酶原激活系统的两种丝氨酸蛋白酶基因(SP-1和SP-2)和两种丝氨酸蛋白酶抑制剂基因(SPI-1和SPI-2),分析了它们的分子结构特征,预测了其可能的作用,并对它们的组织分布及应答不同病原感染的表达变化模式进行了研究。首次从对虾中克隆了C型凝集素基因(Fclectin),它具有两个串联的参与模式识别的功能域(CRD),该分子含有保守的Ca2+结合位点1和具有糖结合潜能的Ca2+结合位点2,比对结果发现该基因可能具有半乳糖结合功能,它属于C型凝集素超家族的成员之一;Northern blot和原位杂交结果显示,Fclectin基因在部分血细胞中呈组成型表达;利用毛细管电泳半定量RT-PCR方法分别研究了细菌和病毒感染后该基因的表达特征,并初步尝试了利用体外培养的原代血细胞系统研究LPS刺激后Fclectin的表达变化。该基因在感染或刺激后表达水平有明显的改变。利用3’和5’RACE技术从中国明对虾血细胞中克隆了一个FcTG基因,它与斑节对虾的谷氨酰胺转移酶基因有93%的相似性;比对结果发现该基因包含一个TG特有的催化核心结构域和一个相对保守的Ca2+结合位点,可能编码一种具有活性的TG;原位杂交结果显示FcTG主要在血细胞中表达,在淋巴器官管腔的血细胞中表达尤为丰富,推断该基因可能主要在吞噬细胞中表达;病原的刺激未