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目的为了研究RACK1缺失突变体与氯离子通道蛋白CLIC1的相互作用,运用分子克隆技术将活化蛋白激酶C受体1(RACK1)缺失突变体构建到真核表达质粒中,研究RACK1缺失突变体在真核细胞内的表达、定位及其与CLIC1蛋白的相互作用。方法以pc DNA3.1-RACK1-FLAG为模板,构建真核表达质粒pc DNA3.1-RACK1(51-317)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1(93-317)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1(135-317)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1(180-317)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1(219-317)-FLAG;琼脂糖凝胶电泳法检测重组质粒是否构建成功。Western blot法检测其在HEK 293T细胞中的表达;运用免疫荧光技术了解RACK1缺失突变体在COS7细胞中的定位情况以及与CLIC1蛋白的共定位情况。免疫共沉淀法进一步探究RACK1缺失突变体蛋白与CLIC1蛋白的相互作用情况,内源性RACK1蛋白CLIC1蛋白的相互作用。结果成功构建了RACK1缺失突变体的真核表达质粒;Western blot法检测发现除pc DNA3.1-RACK1(219-317)-FLAG外其余突变体在HEK 293T细胞的裂解液中均有表达;pc DNA3.1-RACK1(1-317)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1(51-317)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1(93-317)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1(135-317)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1(180-317)-FLAG在HEK 293T细胞的细胞沉淀中均有表达;免疫荧光实验表明,RACK1缺失突变体在COS7细胞中主要定位在胞质,细胞核中也有少量定位,与CLIC1蛋白均存在部分共定位。免疫共沉淀实验证明,内源性的RACK1蛋白与CLIC1蛋白存在相互作用,缺失突变体pc DNA3.1-RACK1(51-317)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1(93-317)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1(135-317)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1(180-317)-FLAG蛋白与CLIC1蛋白存在相互作用。结论成功构建了RACK1缺失突变体真核表达质粒,并在HEK 293T细胞中成功表达;免疫荧光实验表明五个RACK1缺失突变体蛋白与CLIC1蛋白都存在部分共定位;免疫共沉淀实验进一步显示,缺失突变体及内源性RACK1蛋白与CLIC1蛋白在体内存在相互作用。