猪瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）引起的猪瘟（Classical swine fever,CSF）是一种高度传染性疾病,给全世界的养猪业造成了严重的损失。尽管猪瘟在部分国家和地区已被净化,但在我国仍时有发生,持续影响着我国养猪业的健康发展。猪瘟病毒与其他动物病毒一样,在感染和致病过程中会利用宿主细胞成分。因此,研究分析CSFV与宿主细胞成分的相互作用具有十分重要的科研价值。丙酮酸激酶（pyruvate kinase,PyK）是糖酵解途径中的关键酶。研究表明,宿主细胞中的丙酮酸激酶会与流感病毒、丙型肝炎病毒的RNA依赖性RNA聚合酶（RNA-dependent RNA polymerase,Rd Rp）相互作用。本实验室前期通过免疫共沉淀-质谱法（co-immunoprecipitation-mass spectrometry,Co-IP-MS）发现,M型丙酮酸激酶（M type pyruvate kinase,PKM）与猪瘟病毒的C蛋白位于同一个复合体上,而感染过程中C又会与CSFV的Rd Rp（NS5B）相互作用。因此,本研究旨在探究PKM对CSFV复制的影响及其与NS5B的相互作用,获得了以下结果。（1）PKM的敲低抑制CSFV增殖,其过表达促进CSFV的增殖。敲低和过表达宿主细胞内PKM的含量后,利用Western blot和实时荧光定量PCR（real-time PCR）检测CSFV的增殖情况,发现PKM的过表达显著促进CSFV的增殖（P<0.05或P<0.001）,PKM的敲低显著抑制CSFV的增殖（P<0.01或P<0.001）。（2）CSFV的感染促进PKM的表达。通过Western blot与RT-qPCR发现CSFV感染细胞中PKM的含量显著上升（P<0.01或P<0.001）;仔猪感染CSFV后,通过免疫组化（immunohistochemistry,IHC）发现病变部位的PKM含量显著上升（P<0.05、P<0.01或P<0.001）。（3）PKM会与CSFV NS5B结合,但不与CSFV C结合。通过免疫共沉淀（co-immunoprecipitation,Co-IP）与激光共聚焦发现,在CSFV感染的情况下,PKM会与NS5B和C互作,而在未感染CSFV的情况下,PKM仅与CSFV NS5B相互作用;通过GST pull-down（glutathione S-transferase pull-down）发现PKM与NS5B结合,但不与C结合。（4）PKM在CSFV的复制阶段发挥作用。通过IFA发现,CSFV在感染后的10 h释放子代病毒粒子;通过RT-q PCR发现,在CSFV释放子代病毒粒子前,PKM的过表达可以显著促进CSFV基因组的复制（P<0.05或P<0.01）,PKM的敲低显著抑制CSFV基因组的复制（P<0.05、P<0.01或P<0.001）。（5）PKM促进NS5B的活性。构建报告质粒pGL4.21-CSFV-IRES,通过双荧光素酶试验发现,PKM的过表达极显著增强NS5B的活性（P<0.001）,PKM的敲低极显著抑制NS5B的活性（P<0.01）。以上结果表明,PKM通过增强NS5B的活性来促进CSFV的增殖。